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hkfgwww

银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】关于测序的大问题！！！

我有一个purF基因的序列在华大公司测序两次，这个片段连上T载体后前后两次测序结果不相同（有4个碱基突变，两次测序时间不同，不是同一批次的），这是什么原因呢？是测序的问题还是我实验的问题，并且这种情况经常遇见（以前的prs基因序列也有这种问题），我该如何解决呢？难道进行第三次测序？

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1楼 2011-04-10 16:02:16

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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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hkfgwww(金币+4): 2011-04-14 13:38:13

出现这样的结果是非常正常的，一般不是测序的问题，造成这种现象的原因是：
1.在进行PCR扩增的时候，是会随机引入突变的，所以你得到的并非都是序列完全正确的片段，因此长出来的阳性克隆也并非每个都是完全正确的。
2.重组质粒在受体细胞中扩增的时候会受到受体细胞内很多酶的调控和修饰，最常见的现象是很多高度重复的片段丢失了

所以只有测序完全正确的才是你要的克隆，不正确的赶紧丢掉吧