24小时热门版块排行榜    

查看: 923  |  回复: 3

lnwtx

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于测序的问题 已有3人参与

早上的帖子得到了各位虫友的建议,谢谢各位。
关于测序,我还有几个问题请教:
1) BigDye Terminator 操作中跑完PCR后需要提纯,请问提纯的过程中有什么需要注意的吗?例如我们实验室通常用的是100%酒精60ul和125mMEDTA 5ul加到20ul PCR反应产物中,然后室温放置15分钟(为什么?)然后4度 15000rpm 离心20分钟,去掉上清后,再加70%酒精离心10分钟,然后干燥,最后加25ul 去离子甲酰胺,存于-20度待测。
2)对于测序,为什么公司测的比自己测的好?测序操作中有哪些需要注意的?
3)我的基因全长是1068bp,测序时是不是与小片断的测序条件不同?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

为了IF,努力向前冲!哈哈哈哈!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaiyf

金虫 (正式写手)

lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:27
测序公司测得应当没问题。只是大片段的话会在价钱上多一些。因为一个反应只能测 700bp左右吧
多看文献,多学知识
2楼2010-05-20 15:04:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:22
测序样本最好是用水溶,超过900bp最好正反测
3楼2010-05-20 15:37:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

herot

金虫 (小有名气)

★ ★
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 21:40:54
lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:17
1、如果不是要长时间(几年),大批量测序(每周都有几十上百个),没必要自己干,不划算;把测序条件摸索好、固定下来花费的时间、精力、金钱都不是小数目,测序仪更是大投入,而且摸索好了还未必传的下去,没必要。专业的事情就交给专业的公司去做,自己专心干一些公司做不了的更好。
2、测序公司专门干这个的,各个操作都非常熟练,各种条件也都摸透了,当然比自己测得好。
3、1kb的与小片段没什么不同,测双向就行了。
树欲静而风不止
4楼2010-05-20 16:37:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lnwtx 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 7/350 2026-07-31 12:10 by syhhffkrym
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 3/150 2026-07-31 12:08 by syhhffkrym
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 6/300 2026-07-31 12:05 by syhhffkrym
[教师之家] 基础研究怎么拉横向,学校到款任务越来越多,难以完成 拉横向,都有哪些途径啊 +6 锦衣卫寒战 2026-07-28 6/300 2026-07-31 11:27 by syl200707
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液,是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +15 1234567wang 2026-07-25 19/950 2026-07-31 08:30 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +8 布布和一二 2026-07-30 8/400 2026-07-31 01:51 by alongwaytogo
[基金申请] 系统今天又提示维护了,估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 微信指数没变化,科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 17/850 2026-07-30 20:10 by kissu88
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了? +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么? 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 没消息就是被刷了呗 +13 lambert2014 2026-07-24 14/700 2026-07-29 10:38 by msh145800
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了,我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
请填处理意见