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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于测序的问题
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lnwtx

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于测序的问题 已有3人参与

早上的帖子得到了各位虫友的建议，谢谢各位。
关于测序，我还有几个问题请教：
1） BigDye Terminator 操作中跑完PCR后需要提纯，请问提纯的过程中有什么需要注意的吗？例如我们实验室通常用的是100%酒精60ul和125mMEDTA 5ul加到20ul PCR反应产物中，然后室温放置15分钟（为什么？）然后4度 15000rpm 离心20分钟,去掉上清后，再加70%酒精离心10分钟，然后干燥，最后加25ul 去离子甲酰胺，存于-20度待测。
2）对于测序，为什么公司测的比自己测的好？测序操作中有哪些需要注意的？
3）我的基因全长是1068bp,测序时是不是与小片断的测序条件不同？
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为了IF，努力向前冲！哈哈哈哈！
1楼 2010-05-20 14:09:05
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gaiyf

金虫 (正式写手)
lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:27
测序公司测得应当没问题。只是大片段的话会在价钱上多一些。因为一个反应只能测 700bp左右吧
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多看文献，多学知识
2楼2010-05-20 15:04:13
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:22
测序样本最好是用水溶，超过900bp最好正反测
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3楼2010-05-20 15:37:50
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herot

金虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 21:40:54
lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:17
1、如果不是要长时间（几年），大批量测序（每周都有几十上百个），没必要自己干，不划算；把测序条件摸索好、固定下来花费的时间、精力、金钱都不是小数目，测序仪更是大投入，而且摸索好了还未必传的下去，没必要。专业的事情就交给专业的公司去做，自己专心干一些公司做不了的更好。
2、测序公司专门干这个的，各个操作都非常熟练，各种条件也都摸透了，当然比自己测得好。
3、1kb的与小片段没什么不同，测双向就行了。
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树欲静而风不止
4楼2010-05-20 16:37:45
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