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lnwtx

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于测序的问题 已有3人参与

早上的帖子得到了各位虫友的建议,谢谢各位。
关于测序,我还有几个问题请教:
1) BigDye Terminator 操作中跑完PCR后需要提纯,请问提纯的过程中有什么需要注意的吗?例如我们实验室通常用的是100%酒精60ul和125mMEDTA 5ul加到20ul PCR反应产物中,然后室温放置15分钟(为什么?)然后4度 15000rpm 离心20分钟,去掉上清后,再加70%酒精离心10分钟,然后干燥,最后加25ul 去离子甲酰胺,存于-20度待测。
2)对于测序,为什么公司测的比自己测的好?测序操作中有哪些需要注意的?
3)我的基因全长是1068bp,测序时是不是与小片断的测序条件不同?
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为了IF,努力向前冲!哈哈哈哈!
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silicare

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优秀版主

lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:22
测序样本最好是用水溶,超过900bp最好正反测
3楼2010-05-20 15:37:50
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查看全部 4 个回答

gaiyf

金虫 (正式写手)

lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:27
测序公司测得应当没问题。只是大片段的话会在价钱上多一些。因为一个反应只能测 700bp左右吧
多看文献,多学知识
2楼2010-05-20 15:04:13
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herot

金虫 (小有名气)

★ ★
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-20 21:40:54
lnwtx(金币+1): 2010-05-21 08:46:17
1、如果不是要长时间(几年),大批量测序(每周都有几十上百个),没必要自己干,不划算;把测序条件摸索好、固定下来花费的时间、精力、金钱都不是小数目,测序仪更是大投入,而且摸索好了还未必传的下去,没必要。专业的事情就交给专业的公司去做,自己专心干一些公司做不了的更好。
2、测序公司专门干这个的,各个操作都非常熟练,各种条件也都摸透了,当然比自己测得好。
3、1kb的与小片段没什么不同,测双向就行了。
树欲静而风不止
4楼2010-05-20 16:37:45
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