应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题，很纠结！
81/1返回列表
查看: 1498  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ybQuan

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题，很纠结！

本人在做昆虫线粒体基因COII的克隆，有一个问题总是偶尔出现。
鉴定为阳性的克隆菌液测序后，有的是正常的，700多片段，正反测序结果都能找到上下游引物，结果没问题。
但是有的菌液只能在正向或者反向测序中分别找到一条引物，另一条引物找不到。
拼接后壁正常的片段多出几百碱基，插在正常片段的中间。剪切下来BLAST后发现这段是质粒的片段！
为什么会这样的(⊙o⊙)？
是我操作中污染了还是测序中出现问题？
哪位大虾能解释一下？
灰常 3ks and u 能领到BB
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-24 09:34:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2140061

铜虫 (小有名气)
★ ★
ybQuan(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 可以具体一点 2011-03-24 10:49:20
污染了吧
回复此楼
2楼2011-03-24 10:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 2140061 at 2011-03-24 10:04:53:
污染了吧

能具体点不？
这点我知道
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-24 10:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
ybQuan(金币+1):谢谢参与
ybQuan(金币+1): 谢谢 2011-03-24 13:02:52
怀疑是酶切的时候把载体也切了，同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-24 10:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-24 10:59:05:
怀疑是酶切的时候把载体也切了，同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧

谢谢你了
不过我没有做酶切，直接送菌液测序。如果他们测序要做没切的话可能是测序的问题，就不是我克隆的问题了吧
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-24 13:03:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
ybQuan(金币+1):谢谢参与
是不是反向插入载体了？要不你试试把上游引物当下游引物，下游引物当上游引物再找找，不知道行不行
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-03-24 13:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-24 13:26:26:
是不是反向插入载体了？要不你试试把上游引物当下游引物，下游引物当上游引物再找找，不知道行不行

都找不到的
回复此楼
7楼2011-03-24 13:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allanflying

金虫 (小有名气)
★
ybQuan(金币+1):谢谢参与
我也遇到这种情况了，后来怎么解决了啊？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-05-29 00:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ybQuan 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 中科院总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 6/300 2026-04-10 13:28 by moonboat
[考研] 机械还有还有名额吗？太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 293求调剂 +4 勇远库爱314 2026-04-06 4/200 2026-04-10 11:00 by 高维春
[考研] 301求调剂 +6 静静想想 2026-04-05 6/300 2026-04-10 09:15 by Delta2012
[考研] 085500求调剂材料 +8 易11122 2026-04-09 8/400 2026-04-09 23:15 by parmtree
[考研] 284求调剂 +7 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-09 21:30 by bljnqdcc
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-09 8/400 2026-04-09 15:17 by 探123
[考研] 368化学求调剂 +13 wwwwabcde 2026-04-07 14/700 2026-04-09 14:47 by heaven_jay
[考研] 285求调剂 +12 AZMK 2026-04-05 18/900 2026-04-08 20:43 by 逆水乘风
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 304求调剂 +10 素年祭语 2026-04-06 17/850 2026-04-08 09:05 by 蓝云思雨
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 334分控制工程求调剂 +4 姜尚真sadasd 2026-04-03 4/200 2026-04-07 09:26 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿华中农业大学0710（A）初试329分 求调剂 +5 一名26考研生 2026-04-04 5/250 2026-04-07 08:54 by 18828373951
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
[考研] 一志愿南农090401，268，求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
[考研] 319求调剂 +4 星星不眨眼喽 2026-04-03 4/200 2026-04-04 16:25 by 中飞院空管学院�
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭