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nijunjun

禁虫 (初入文坛)
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1楼2011-09-14 16:12:13
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tian1203

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-14 18:15:03
nijunjun(金币+5): 谢谢 2011-09-14 22:51:45
nijunjun(金币+3): 感谢您 2011-09-14 22:52:36
引用回帖:
1楼: Originally posted by nijunjun at 2011-09-14 16:12:13:
我克隆了一段启动子序列，然后酶切后插入PGL载体里。此载体在多克隆位点下游有表达荧光素酶的基因。  我插入的启动子序列会不会影响荧光素酶基因表达发生SHIFT?     是不是在载体上表达只从ATG开始，不管ATG前面的 ...

荧光素酶表达载体都是这样构建的啊，不太明白的意思？
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别紧张，我不是什么好人...
2楼2011-09-14 17:34:51
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-09-15 08:37:34
只要确保启动子连接进来就可以进行下有启动了，就会进行正常表达了！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-09-14 20:41:52
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nijunjun

禁虫 (初入文坛)
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4楼2011-09-14 22:55:24
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

nijunjun(金币+4): 我转染时用了一个海肾荧光素酶载体共转染做内对照 是不是只能用WESTEWN BLOTING 检测荧光素酶是否表达？ 谢谢你 2011-09-15 08:59:47
是否有阳性对照，证明你的荧光素酶可以表达，且有活性!
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真相是最大的奢侈品
5楼2011-09-15 08:36:56
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
5楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-15 08:36:56:
是否有阳性对照，证明你的荧光素酶可以表达，且有活性!

我不做这个，不太懂，我只是感到疑问！
你上面不是说用萤火虫荧光检测的？
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真相是最大的奢侈品
6楼2011-09-15 09:06:12
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tian1203

银虫 (著名写手)
★ ★
wanhscn(金币+2): 同意！ 2011-09-15 11:14:42
引用回帖:
4楼: Originally posted by nijunjun at 2011-09-14 22:55:24:
我构建好载体了   酶切验证没问题    测序也没问题    但是检测萤火虫荧光基本没有活性   不知道是哪步出现问题

可能是细胞的原因（你的启动子或许本身在那种细胞中表达值就不高）、也可能是转染时质粒的浓度没把握好（推荐的量不一定适合你构建的载体或者细胞）
我的转染表达值也不高。打算找另外的2种细胞重新转染，检测。
你的海肾的表达值正常、还有Basic、Control的值正常吗
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别紧张，我不是什么好人...
7楼2011-09-15 09:10:32
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