应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题，很纠结！
51/1返回列表
查看: 2098  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题，很纠结！

本人在做昆虫线粒体基因COII的克隆，有一个问题总是偶尔出现。
鉴定为阳性的克隆菌液测序后，有的是正常的，700多片段，正反测序结果都能找到上下游引物，结果没问题。
但是有的菌液只能在正向或者反向测序中分别找到一条引物，另一条引物找不到。
拼接后壁正常的片段多出几百碱基，插在正常片段的中间。剪切下来BLAST后发现这段是质粒的片段！
为什么会这样的(⊙o⊙)？
是我操作中污染了还是测序中出现问题？
哪位大虾能解释一下？
灰常 3ks and u 能领到BB
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-24 09:34:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
ybQuan(金币+1):谢谢参与
是不是反向插入载体了？要不你试试把上游引物当下游引物，下游引物当上游引物再找找，不知道行不行
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-03-24 13:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 2140061 at 2011-03-24 10:04:53:
污染了吧

能具体点不？
这点我知道
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-24 10:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
ybQuan(金币+1):谢谢参与
ybQuan(金币+1): 谢谢 2011-03-24 13:02:52
怀疑是酶切的时候把载体也切了，同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-24 10:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-24 10:59:05:
怀疑是酶切的时候把载体也切了，同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧

谢谢你了
不过我没有做酶切，直接送菌液测序。如果他们测序要做没切的话可能是测序的问题，就不是我克隆的问题了吧
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-24 13:03:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:31 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 11/550 2026-08-23 02:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭