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ybQuan

金虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题,很纠结!

本人在做昆虫线粒体基因COII的克隆,有一个问题总是偶尔出现。
鉴定为阳性的克隆菌液测序后,有的是正常的,700多片段,正反测序结果都能找到上下游引物,结果没问题。
但是有的菌液只能在正向或者反向测序中分别找到一条引物,另一条引物找不到。
拼接后壁正常的片段多出几百碱基,插在正常片段的中间。剪切下来BLAST后发现这段是质粒的片段!
为什么会这样的(⊙o⊙)?
是我操作中污染了还是测序中出现问题?
哪位大虾能解释一下?
灰常 3ks and u 能领到BB
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ybQuan

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-24 13:26:26:
是不是反向插入载体了?要不你试试把上游引物当下游引物,下游引物当上游引物再找找,不知道行不行

都找不到的
7楼2011-03-24 13:30:14
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ybQuan

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by 2140061 at 2011-03-24 10:04:53:
污染了吧

能具体点不?
这点我知道
3楼2011-03-24 10:38:39
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)



ybQuan(金币+1):谢谢参与
ybQuan(金币+1): 谢谢 2011-03-24 13:02:52
怀疑是酶切的时候把载体也切了,同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧
4楼2011-03-24 10:59:05
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ybQuan

金虫 (著名写手)


引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-24 10:59:05:
怀疑是酶切的时候把载体也切了,同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧

谢谢你了
不过我没有做酶切,直接送菌液测序。如果他们测序要做没切的话可能是测序的问题,就不是我克隆的问题了吧
5楼2011-03-24 13:03:50
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