应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题，很纠结！
51/1返回列表
查看: 1226  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于分子克隆的技术问题，很纠结！

本人在做昆虫线粒体基因COII的克隆，有一个问题总是偶尔出现。
鉴定为阳性的克隆菌液测序后，有的是正常的，700多片段，正反测序结果都能找到上下游引物，结果没问题。
但是有的菌液只能在正向或者反向测序中分别找到一条引物，另一条引物找不到。
拼接后壁正常的片段多出几百碱基，插在正常片段的中间。剪切下来BLAST后发现这段是质粒的片段！
为什么会这样的(⊙o⊙)？
是我操作中污染了还是测序中出现问题？
哪位大虾能解释一下？
灰常 3ks and u 能领到BB
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-24 09:34:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jiangzhiang at 2011-03-24 13:26:26:
是不是反向插入载体了？要不你试试把上游引物当下游引物，下游引物当上游引物再找找，不知道行不行

都找不到的
回复此楼
7楼2011-03-24 13:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 2140061 at 2011-03-24 10:04:53:
污染了吧

能具体点不？
这点我知道
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-24 10:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
ybQuan(金币+1):谢谢参与
ybQuan(金币+1): 谢谢 2011-03-24 13:02:52
怀疑是酶切的时候把载体也切了，同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-24 10:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybQuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-24 10:59:05:
怀疑是酶切的时候把载体也切了，同目的基因连接到一起了。
再做一遍吧

谢谢你了
不过我没有做酶切，直接送菌液测序。如果他们测序要做没切的话可能是测序的问题，就不是我克隆的问题了吧
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-24 13:03:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭