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【求助/交流】关于体外转录的模板已有6人参与
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今天在一片文献上看到：体外转录的模板可以是带有T7启动子的DNA的PCR产物，也可以是含目的DNA的线性化的质粒。有几个问题不太清楚： 1.如果模板选用带启动子的PCR产物，在进行体外转录前，P出了来的产物需要测序吗，如果需要，又该怎么测呢？ 2.如果模板选用线性化质粒，将目的片段连子载体T7启动子下游后，启动子与目的片段之间的多余序列会不会影响转录产物啊？ |
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lixg
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请问如果用于显微注射的话，只有T7启动子，kozak和目的基因的ORF区，可以体外转录，纯化后用于注射么？没有polyA对稳定性影响不大吧？如果线性化酶切位点距离终止密码子比较远是不是不太好？例如2KB左右？因为我用pcdna3.1，在bgh的polyA后面附近没有合适的酶切位点呀。只搜到BbsI位点（GAAGAC(N)2)，这个酶怎么样？ |
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7楼2012-06-14 21:26:40
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