应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于体外转录的模板
51/1返回列表
查看: 7286  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

谁知道

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于体外转录的模板 已有6人参与

今天在一片文献上看到：体外转录的模板可以是带有T7启动子的DNA的PCR产物，也可以是含目的DNA的线性化的质粒。有几个问题不太清楚：
1.如果模板选用带启动子的PCR产物，在进行体外转录前，P出了来的产物需要测序吗，如果需要，又该怎么测呢？
2.如果模板选用线性化质粒，将目的片段连子载体T7启动子下游后，启动子与目的片段之间的多余序列会不会影响转录产物啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
每个人一辈子从来都是一个人
1楼 2010-05-27 19:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilyjimei

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
也想请教下如何设计带有T7启动子的某序列的引物？T7引物和T7启动子是相同还是互补序列呢？因急用期待尽快回复，O(∩_∩)O谢谢!
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-15 14:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~ 2010-05-29 09:36:59
你提的问题很好。首先回答第一个问题：用带有T7启动子的DNA的PCR产物做模板不用测序，但最好是用酚氯仿抽提后，取少量做个单酶切（从PCR产物内部找个酶切位点），看看大小是否跟预期的一致。但一般不用这种模板。第二种模板的启动子与目的片段之间的多余序列不会影响转录。尽管用。我们都是用第二种模板。
赞一下(3人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

boby922
2楼2010-05-28 08:18:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谁知道

铁虫 (小有名气)
呵呵，学习了，吗、那么请问常用于做体外转录的含T7启动子的质粒都有哪些啊？因为我的目的片段很短，只有100nt，想找一个启动子与多克隆位点之间距离较短的质粒，谢谢啦！
赞一下 回复此楼
每个人一辈子从来都是一个人
3楼2010-05-28 14:55:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谁知道

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-05-28 08:18:42:
你提的问题很好。首先回答第一个问题：用带有T7启动子的DNA的PCR产物做模板不用测序，但最好是用酚氯仿抽提后，取少量做个单酶切（从PCR产物内部找个酶切位点），看看大小是否跟预期的一致。但一般不用这种模板。 ...

呵呵，学习了，那么请问常用于做体外转录的含T7启动子的质粒都有哪些啊？因为我的目的片段很短，只有100nt，想找一个启动子与多克隆位点之间距离较短的质粒，谢谢啦！
赞一下 回复此楼
每个人一辈子从来都是一个人
4楼2010-05-28 14:55:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 19:21 by eObJPa4gWmp6
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 18:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:01 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 17:49 by eObJPa4gWmp6
[文学芳草园] 两块石头 +7 阿美_Lml888 2026-09-03 9/450 2026-09-06 17:48 by myrtle
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 17:21 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 9/450 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才！！！ +5 SCSIOyxguo 2026-09-03 8/400 2026-09-06 15:06 by 可爱小花朵
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭