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谁知道

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于体外转录的模板已有6人参与

今天在一片文献上看到：体外转录的模板可以是带有T7启动子的DNA的PCR产物，也可以是含目的DNA的线性化的质粒。有几个问题不太清楚：
1.如果模板选用带启动子的PCR产物，在进行体外转录前，P出了来的产物需要测序吗，如果需要，又该怎么测呢？
2.如果模板选用线性化质粒，将目的片段连子载体T7启动子下游后，启动子与目的片段之间的多余序列会不会影响转录产物啊？
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每个人一辈子从来都是一个人
1楼2010-05-27 19:49:28
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谁知道

铁虫 (小有名气)
呵呵，学习了，吗、那么请问常用于做体外转录的含T7启动子的质粒都有哪些啊？因为我的目的片段很短，只有100nt，想找一个启动子与多克隆位点之间距离较短的质粒，谢谢啦！
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每个人一辈子从来都是一个人
3楼2010-05-28 14:55:12
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谁知道

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-05-28 08:18:42:
你提的问题很好。首先回答第一个问题：用带有T7启动子的DNA的PCR产物做模板不用测序，但最好是用酚氯仿抽提后，取少量做个单酶切（从PCR产物内部找个酶切位点），看看大小是否跟预期的一致。但一般不用这种模板。 ...

呵呵，学习了，那么请问常用于做体外转录的含T7启动子的质粒都有哪些啊？因为我的目的片段很短，只有100nt，想找一个启动子与多克隆位点之间距离较短的质粒，谢谢啦！
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每个人一辈子从来都是一个人
4楼2010-05-28 14:55:51
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