24小时热门版块排行榜    

查看: 2130  |  回复: 3

heyide

木虫 (小有名气)

[求助] 启动子(用来在E.coli细胞内质粒上启动子下游适量本底表达一个特定的标记基因)

寻找在E.coli细胞内质粒上来适量本底表达一个特定的标记基因的启动子。
想在E.coli细胞内质粒上稳定表达一个荧光蛋白基因,用来作为实验的内参,无奈找不到合适的启动子,Lac系列的需要诱导表达不符合我的实验要求,用Amp promoter之后发现下游基因的本底表达量很低。
有谁做过类似实验,能否给点可参考的promoter?
谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heyide

木虫 (小有名气)

咋木有人来解答下
2楼2012-12-07 13:07:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
lac系统的一定需要诱导才能表达么?那是因为有lacI的基因会结合到调控区才需要诱导,再说,你只加上启动子序列,不加lacI的结合位点不就不用诱导了么
3楼2012-12-07 16:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heyide

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-12-07 16:50:35
lac系统的一定需要诱导才能表达么?那是因为有lacI的基因会结合到调控区才需要诱导,再说,你只加上启动子序列,不加lacI的结合位点不就不用诱导了么

我查了很多原核表达质粒都是需要诱导的,T7lac系列,tac系列,需要IPTG诱导;还有一些是需要噬菌体侵染诱导或是温度shift诱导。我用一些质粒上标准出的Amp氨苄抗生素基因的promoter做实验,发现在这个启动子加个其他的抗生素抗性基因,它的表达量很低,在抗性平板上都无法生长。最近我打算换个T5启动子试试,这个噬菌体来源启动子,E.coli自身RNA聚合酶可识别这个启动子,起始转录
4楼2012-12-09 01:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 heyide 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕306英一数二 +8 z1z2z3879 2026-03-16 10/500 2026-03-18 00:01 by 星空星月
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +4 share_joy 2026-03-16 4/200 2026-03-17 21:32 by hmn_wj
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考博] 26申博 +4 八旬速览 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见