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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 启动子（用来在E.coli细胞内质粒上启动子下游适量本底表达一个特定的标记基因）
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heyide

木虫 (小有名气)

[求助] 启动子（用来在E.coli细胞内质粒上启动子下游适量本底表达一个特定的标记基因）

寻找在E.coli细胞内质粒上来适量本底表达一个特定的标记基因的启动子。
想在E.coli细胞内质粒上稳定表达一个荧光蛋白基因，用来作为实验的内参，无奈找不到合适的启动子，Lac系列的需要诱导表达不符合我的实验要求，用Amp promoter之后发现下游基因的本底表达量很低。
有谁做过类似实验，能否给点可参考的promoter？
谢谢！
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1楼 2012-12-04 23:35:18
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lac系统的一定需要诱导才能表达么？那是因为有lacI的基因会结合到调控区才需要诱导，再说，你只加上启动子序列，不加lacI的结合位点不就不用诱导了么
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3楼2012-12-07 16:50:35
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heyide

木虫 (小有名气)
咋木有人来解答下
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2楼2012-12-07 13:07:22
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heyide

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-12-07 16:50:35
lac系统的一定需要诱导才能表达么？那是因为有lacI的基因会结合到调控区才需要诱导，再说，你只加上启动子序列，不加lacI的结合位点不就不用诱导了么

我查了很多原核表达质粒都是需要诱导的，T7lac系列，tac系列，需要IPTG诱导；还有一些是需要噬菌体侵染诱导或是温度shift诱导。我用一些质粒上标准出的Amp氨苄抗生素基因的promoter做实验，发现在这个启动子加个其他的抗生素抗性基因，它的表达量很低，在抗性平板上都无法生长。最近我打算换个T5启动子试试，这个噬菌体来源启动子，E.coli自身RNA聚合酶可识别这个启动子，起始转录
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4楼2012-12-09 01:02:59
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