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junxiao0320金虫 (小有名气)
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[求助]
我想知道，pQE30中的T5启动子
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pQE30中的T5启动子也是噬菌体里的？为什么会在M15，XLI-blue里表达呢？ 寻求确切表述，谢谢 |
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2楼2012-05-08 12:09:11
junxiao0320
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3楼2012-05-09 09:12:41
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PQE是可以在DH5A中表达的。但该菌株未进行蛋白酶突变，可能有潜在的降解蛋白的风险。 原本的PQE系统是带有lacI的，几乎可以在所有的E.COLI中使用。 但后来Qiagen去了这一功能模块（估计是故意去的），而T5是配合LacO使用的，所以只能在官方的配套菌株中使用。或者在含有lacIq模块的菌株中使用。 而TOP10,或DH10B等野生型lacI 菌株则不适合，因为lacI蛋白数量不足以抑制多拷贝质粒上的T5/lacO的表达，而造成未加诱导剂时的泄露表达，这在表达一些毒蛋白时会造成菌株致死或生长不好。 pQE vectors combine a powerful phage T5 promoter (recognized by E. coli RNA polymerase) with a double lac operator repression module to provide tightly regulated, high-level expression of recombinant proteins in E. coli. Protein synthesis is effectively blocked in the presence of high levels of lac repressor and the stability of cytotoxic constructs is enhanced. |
4楼2012-05-10 08:42:42
junxiao0320
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这个意思是我的pQE可以在野生型菌中表达，只是一些毒蛋白会造成菌株致死或生长不好，对吧？5楼2012-05-10 08:51:14
junxiao0320: 回帖置顶 2012-06-26 07:45:41
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For very toxic proteins, use pQE-80L series of expression vectors in the M15[pREP4] host strain. ----------------------------------------- Qiagen pQE vector for toxic protein Example toxic proteins: membrane proteins or proteins that interact with DNA or interfere with electron transport. 1, Do not kept bacteria in culture media or on plates for several days. 2, Grow bacteria cells in the presence of high levels of ampicillin (200 μg/ml) or carbenicillin (50 μg/ml). 3, Do not use overnight starter cultures. 4, Colonies from a fresh plate should be inoculated into a small starter culture and grown for 2–3 hours, until mid-log phase. This starter culture should then be diluted 20–50-fold in prewarmed medium and grown to an OD600 of approximately 0.5 before induction. 5, For very toxic proteins, use pQE-80L series of expression vectors in the M15[pREP4] host strain. |
6楼2012-06-25 11:37:13
junxiao0320
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7楼2012-06-26 07:45:34
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