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junxiao0320金虫 (小有名气)
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[求助]
我想知道，pQE30中的T5启动子
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pQE30中的T5启动子也是噬菌体里的？为什么会在M15，XLI-blue里表达呢？ 寻求确切表述，谢谢 |
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junxiao0320
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3楼2012-05-09 09:12:41
2楼2012-05-08 12:09:11
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PQE是可以在DH5A中表达的。但该菌株未进行蛋白酶突变，可能有潜在的降解蛋白的风险。 原本的PQE系统是带有lacI的，几乎可以在所有的E.COLI中使用。 但后来Qiagen去了这一功能模块（估计是故意去的），而T5是配合LacO使用的，所以只能在官方的配套菌株中使用。或者在含有lacIq模块的菌株中使用。 而TOP10,或DH10B等野生型lacI 菌株则不适合，因为lacI蛋白数量不足以抑制多拷贝质粒上的T5/lacO的表达，而造成未加诱导剂时的泄露表达，这在表达一些毒蛋白时会造成菌株致死或生长不好。 pQE vectors combine a powerful phage T5 promoter (recognized by E. coli RNA polymerase) with a double lac operator repression module to provide tightly regulated, high-level expression of recombinant proteins in E. coli. Protein synthesis is effectively blocked in the presence of high levels of lac repressor and the stability of cytotoxic constructs is enhanced. |
4楼2012-05-10 08:42:42
junxiao0320
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这个意思是我的pQE可以在野生型菌中表达，只是一些毒蛋白会造成菌株致死或生长不好，对吧？5楼2012-05-10 08:51:14