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谁知道

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 44.2
帖子: 54
在线: 28.9小时
虫号: 902292
注册: 2009-11-13
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

[交流] 【求助/交流】关于体外转录的模板已有6人参与

今天在一片文献上看到：体外转录的模板可以是带有T7启动子的DNA的PCR产物，也可以是含目的DNA的线性化的质粒。有几个问题不太清楚：
1.如果模板选用带启动子的PCR产物，在进行体外转录前，P出了来的产物需要测序吗，如果需要，又该怎么测呢？
2.如果模板选用线性化质粒，将目的片段连子载体T7启动子下游后，启动子与目的片段之间的多余序列会不会影响转录产物啊？

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每个人一辈子从来都是一个人

1楼2010-05-27 19:49:28

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xuesen1223

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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注册: 2014-05-09
专业: 农业昆虫学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

送红花一朵

引用回帖:

7楼: Originally posted by boby922 at 2012-06-14 21:26:40
请问如果用于显微注射的话，只有T7启动子，kozak和目的基因的ORF区，可以体外转录，纯化后用于注射么？没有polyA对稳定性影响不大吧？如果线性化酶切位点距离终止密码子比较远是不是不太好？例如2KB左右？因为我用 ...

亲我用的也是pcDNA3，单酶切想用SmaI，距离终止子1000bp，会有影响吗

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8楼2014-06-02 13:37:53

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