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bevan09

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【分子生物】EPI帖

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1楼2011-07-25 20:01:08
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wsh01300

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-25 23:29:26
bevan09(金币+1): 2011-07-26 08:03:52
测序好像是只送菌就行了吧,或是直接送质粒也行.实时定量没做过,不过实时定量应该是用RNA来做PCR.
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2楼2011-07-25 20:27:55
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 正解 2011-07-25 23:30:09
西瓜: 不同实验不同做法，测表达量是用RNA没错，不知道楼主是否做其他方面。 2011-07-25 23:32:54
bevan09(金币+5): 2011-07-26 08:04:18
菌液质粒或者PCR片段都可以用来测序，只需在填单的时候注明就行了，不过测菌液要比测PCR产物贵点，单就你的实验来讲只能测PCR产物。既然要做定量不明白你为什么会提DNA来扩片段而不是提mRNA做RT-PCR。正常的实验思路是选好你要做Q-PCR的位点设计引物，提取mRNA，反转录得到cDNA，然后构建重组质粒，通过精确定量确定拷贝数，稀释成不同拷贝数用来做标准曲线，被定量的的模板也是通过mRNA反转录来得到
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-07-25 20:54:33
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cloverplm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2011-07-25 23:35:17
bevan09(金币+4): 2011-07-26 08:04:24
你自己纯化PCR产物就是了，连载体后再送给公司质粒去测序，这个都是很简单的操作。这个质粒也可以用来做荧光定量PCR的模板，用之前去测一下OD，就能知道你提的质粒质量如何了。做标准曲线是个细致的活，加样量一定要准，不然标准曲线就难看死。多做几次摸索摸索，不是太难。
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净——静——竞——进
4楼2011-07-25 22:50:33
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bevan09

禁虫 (小有名气)
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5楼2011-07-26 08:13:06
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bevan09

禁虫 (小有名气)
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6楼2011-07-26 08:19:10
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bevan09

禁虫 (小有名气)
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7楼2011-07-26 08:20:32
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bevan09

禁虫 (小有名气)
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8楼2011-07-26 08:21:20
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cloverplm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bevan09 at 2011-07-26 08:21:20:
要是自己纯化的话，是不是要买纯化试剂盒的呀？我不想麻烦，想直接给公司纯化了。上次打电话问过一个测序公司，说：只要把菌液送过去就行了，到时候他帮我抽提质粒的。

买个胶回收的试剂盒就行了，很方便的。QIGEN的不错哦，可以试试。公司只要你给Money当然什么都愿意做了。
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净——静——竞——进
9楼2011-07-26 20:54:07
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bevan09

禁虫 (小有名气)
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10楼2011-07-26 23:01:42
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