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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 正解 2011-07-25 23:30:09
西瓜: 不同实验不同做法，测表达量是用RNA没错，不知道楼主是否做其他方面。 2011-07-25 23:32:54
bevan09(金币+5): 2011-07-26 08:04:18

菌液质粒或者PCR片段都可以用来测序，只需在填单的时候注明就行了，不过测菌液要比测PCR产物贵点，单就你的实验来讲只能测PCR产物。既然要做定量不明白你为什么会提DNA来扩片段而不是提mRNA做RT-PCR。正常的实验思路是选好你要做Q-PCR的位点设计引物，提取mRNA，反转录得到cDNA，然后构建重组质粒，通过精确定量确定拷贝数，稀释成不同拷贝数用来做标准曲线，被定量的的模板也是通过mRNA反转录来得到

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3楼2011-07-25 20:54:33

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西瓜(金币+4): Good！ 2011-07-25 23:35:17
bevan09(金币+4): 2011-07-26 08:04:24

你自己纯化PCR产物就是了，连载体后再送给公司质粒去测序，这个都是很简单的操作。这个质粒也可以用来做荧光定量PCR的模板，用之前去测一下OD，就能知道你提的质粒质量如何了。做标准曲线是个细致的活，加样量一定要准，不然标准曲线就难看死。多做几次摸索摸索，不是太难。

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4楼2011-07-25 22:50:33

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