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hkfgwww

银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】关于测序的大问题！！！

我有一个purF基因的序列在华大公司测序两次，这个片段连上T载体后前后两次测序结果不相同（有4个碱基突变，两次测序时间不同，不是同一批次的），这是什么原因呢？是测序的问题还是我实验的问题，并且这种情况经常遇见（以前的prs基因序列也有这种问题），我该如何解决呢？难道进行第三次测序？

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1楼 2011-04-10 16:02:16

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zgb1982

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 12:44:00:
出现这样的结果是非常正常的，一般不是测序的问题，造成这种现象的原因是：
1.在进行PCR扩增的时候，是会随机引入突变的，所以你得到的并非都是序列完全正确的片段，因此长出来的阳性克隆也并非每个都是完全正确 ...

不见得完全是这样吧。要看对比的模板是不是完全相同了，我遇到过这种情况啊，三次以上的扩增比对，每次都重新提RNA反转的，结果都在相同的地方出现突变