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hkfgwww

银虫 (正式写手)


[交流] 【求助】关于测序的大问题!!!

我有一个purF基因的序列在华大公司测序两次,这个片段连上T载体后前后两次测序结果不相同(有4个碱基突变,两次测序时间不同,不是同一批次的),这是什么原因呢?是测序的问题还是我实验的问题,并且这种情况经常遇见(以前的prs基因序列也有这种问题),我该如何解决呢?难道进行第三次测序?
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hkfgwww

银虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 12:44:00:
出现这样的结果是非常正常的,一般不是测序的问题,造成这种现象的原因是:
1.在进行PCR扩增的时候,是会随机引入突变的,所以你得到的并非都是序列完全正确的片段,因此长出来的阳性克隆也并非每个都是完全正确 ...

谢谢,这个问题还真得注意。
16楼2011-04-14 13:38:56
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hkfgwww(金币+2): 2011-04-10 16:43:30
楼主可以参考一下测序的峰图分析一下!
2楼2011-04-10 16:07:33
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gene001

金虫 (正式写手)


hkfgwww(金币+2): 2011-04-13 14:28:12
1、PCR产物是否同一批的?要是同一批,就应该好好分析测序结果图(峰图)!
2、四个不同碱基是否导致编码氨基酸的改变?如果没有,你用该序列应该不会有问题,要是氨基酸改变了,你真得重新测序!
4楼2011-04-11 18:41:31
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forrestgump

新虫 (著名写手)


hkfgwww(金币+2): 2011-04-13 14:29:59
我感觉你的测序的结果可能是突变造成的。
5楼2011-04-11 21:58:11
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