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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】关于测序的大问题！！！
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于测序的大问题！！！

我有一个purF基因的序列在华大公司测序两次，这个片段连上T载体后前后两次测序结果不相同（有4个碱基突变，两次测序时间不同，不是同一批次的），这是什么原因呢？是测序的问题还是我实验的问题，并且这种情况经常遇见（以前的prs基因序列也有这种问题），我该如何解决呢？难道进行第三次测序？
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1楼 2011-04-10 16:02:16
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
hkfgwww(金币+4): 2011-04-13 14:31:32
silicare(金币+2, EPI+1): 在理 2011-04-15 08:20:08
首先，关于你的克隆来源的问题。可能性之一是，本来就有不一样的。第二，（RT）PCR时用的是什么酶？taq还是别的？总的来说，千分之5左右的差异突变的概率是有的。第三，质粒或菌夜送测样品的质量。当然，最后就是测序的问题了。
如果你要找差异，那么最好保证每一步都是完美的，包括试剂。比对你的结果，是不是同义替换？多送几个样品也是一个没有办法的办法。相同克隆的，不同克隆的。
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7楼2011-04-12 01:27:36
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
hkfgwww(金币+2): 2011-04-10 16:43:30
楼主可以参考一下测序的峰图分析一下！
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2楼2011-04-10 16:07:33
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gene001

金虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+2): 2011-04-13 14:28:12
1、PCR产物是否同一批的？要是同一批，就应该好好分析测序结果图（峰图）！
2、四个不同碱基是否导致编码氨基酸的改变？如果没有，你用该序列应该不会有问题，要是氨基酸改变了，你真得重新测序！
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4楼2011-04-11 18:41:31
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forrestgump

新虫 (著名写手)
hkfgwww(金币+2): 2011-04-13 14:29:59
我感觉你的测序的结果可能是突变造成的。
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5楼2011-04-11 21:58:11
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