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半夏今年

新虫 (初入文坛)

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[求助] 基因敲除的假阳性问题已有1人参与

本人做大肠的基因敲除实验，做了很多批，可是都是假阳性，操作步骤也都是按照文献上讲的，电转后涂卡纳平板，平板上会长，但菌落鉴定都不是重组菌，DpnⅠ也换过了，现在不知道哪里出了问题，求帮助啊~~~~~~~

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1楼 2013-06-08 19:02:28

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半夏今年

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引用回帖:

9楼: Originally posted by melisax at 2013-06-13 21:39:25
同源性太好。。。。我的意思是指你的同源臂跟除目的基因以外的基因也有同源性，然后结合效果更好，然后就重组到别的位置了。
我觉得你应该把你打靶片段再次确认下，我以前也是，片段出现问题，全部都是假阳性。敲除 ...

恩，我也这么想过，打靶片段是不是结合到别的位置了，但是测序的话只能测出卡纳片段，没有同源臂的序列，怎样确定它与其他基因位置的同源性呢