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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因敲除的假阳性问题
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橄榄树孙燕姿

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by melisax at 2013-06-11 00:57:36
1.确定你的同源臂大小，虽然理论上是50bp就够了，但是如果同源臂同源性太好会容易打偏，我师兄是这么解释的
2. 我自己的经验是dpnI切过夜，然后电转，后培养过夜后离心，把菌溶200微左右全部涂一个板子上。我用的是 ...

那你们感受态是按照那个方法做的？为什么电转后要培养过夜，培养过夜时用什么无抗培养基还是有抗培养基？
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11楼2014-06-16 10:20:02
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夏天的风铃

新虫 (初入文坛)
请问你最后怎么解决的？因为我碰到和你一样的情况
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12楼2015-01-18 10:45:19
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yunjian123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 半夏今年 at 2013-06-13 09:57:34
谢谢了，我有几个问题：1、什么叫同源性太好容易打偏？难道不是同源性越高越好吗，我一直这么以为的，，，，，
2、电转后我是加1微升LB复苏，在EP管里面，一般复苏时间是2-3小时，如果过夜的话小EP管里的溶氧肯定 ...

你好，你提到的这个打靶片段就是上下游同源臂不？你说的全是假阳性的那次，是哪方面的错误，我现在的问题和你当时一样。
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13楼2015-03-20 20:16:41
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yunjian123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by melisax at 2013-06-13 21:39:25
同源性太好。。。。我的意思是指你的同源臂跟除目的基因以外的基因也有同源性，然后结合效果更好，然后就重组到别的位置了。
我觉得你应该把你打靶片段再次确认下，我以前也是，片段出现问题，全部都是假阳性。敲除 ...

你好，打靶片段是上下游同源臂吗？你那次出现假阳性的时候是什么问题。
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14楼2015-03-20 20:19:08
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yunjian123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 夏天的风铃 at 2015-01-18 10:45:19
请问你最后怎么解决的？因为我碰到和你一样的情况

你好，你的问题解决了吗
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15楼2015-03-20 20:32:07
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yun1110

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问您解决了吗？我遇到了同样的问题，求助

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2015-09-05 20:54:23
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