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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

[求助] T载体连接问题

前期克隆基因往T载体上面连接发生了突变，现在换高保真酶后还是往T载体上面连接，可是发生很奇怪的事情。用之前连上T载发生突变的质粒作为对照，现在提出质粒比其小，可是双酶切可以切出我的目的条带，但酶切后的载体比T载体大（T载体大约2600bp左右，可是现今酶切后显示载体有3KB多），pcr验证有很淡的目的条带。不知是怎么回事，之前连接T载体，出过一样的情况，后送去测序，结果全是双峰。不知是不是有杂菌，还是？求高人指教！
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1楼 2012-06-10 21:37:52
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-11 13:52:35
wcx蜗牛: 金币+2 2012-06-13 20:41:00
染菌，载体不纯都是可能的原因。另外，由于质粒构型不同，质粒间比较大小是不准确的。你用的高保真酶有A么？没有的话要加A
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相信自己
2楼2012-06-11 09:10:27
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l68266152 at 2012-06-11 09:10:27
染菌，载体不纯都是可能的原因。另外，由于质粒构型不同，质粒间比较大小是不准确的。你用的高保真酶有A么？没有的话要加A

高保真没事加A的，我是怕染菌，用那管菌液做了三区划线，今天下提看看。我不是直接比大小，而是双酶切后，载体片段比T载体要大很多。
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3楼2012-06-11 09:54:07
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wcx蜗牛: 金币+1 2012-06-13 20:41:09
是不是可能出现非特异性的酶切呢。
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4楼2012-06-11 15:37:49
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