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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体连接问题
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hellolin

金虫 (小有名气)

[求助] T载体连接问题

现在在做5，RACE。扩增出目的条带后胶回收，然后用特异性引物去嵌套验证，结果也有目的大小的条带扩增出来，这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的。但是用T载体连接后转化到大肠杆菌中挑斑验证时用同样的嵌套引物去验证却没有扩增出条带，请问这是为什么啊？
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scienceguy
1楼 2011-10-28 11:19:56
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主的片段多长，是否带A？
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jiayoubashaonian
2楼2011-10-28 11:23:07
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-10-28 11:23:07:
楼主的片段多长，是否带A？

片段1K左右，不是PCR产物一般都带A的吗
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scienceguy
3楼2011-10-28 11:26:58
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-31 16:48:01
首先能确定连上了吧。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2011-10-28 11:33:47
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hellolin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gongeleven at 2011-10-28 11:33:47:
首先能确定连上了吧。。
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

以前一直都是用这个方法连接的，没出现过什么问题~
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scienceguy
5楼2011-10-28 11:38:01
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madengyu

禁虫 (小有名气)
hellolin(金币+1): 用的是PCR mix，都会有加A的。至于菌没裂开应该不太可能吧。。。。 2011-10-28 12:41:23
本帖内容被屏蔽
6楼2011-10-28 11:39:33
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hellolin(金币+1): 已经重复过了。。。。。。 2011-10-28 12:39:33
转化后验证不一定都有条带。
建议重新挑菌落验证，还是没有的话，重新做连接转化吧
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7楼2011-10-28 12:08:36
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 同意! 2011-10-31 16:47:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by hellolin at 2011-10-28 11:26:58:
片段1K左右，不是PCR产物一般都带A的吗

高保真的酶一般不带A，平末端
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jiayoubashaonian
8楼2011-10-28 14:40:58
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xiaohaozi9876

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有clony说明克隆成功，估计你做克隆pcr做的不熟练，没有加进sample

我比较讨厌做克隆pcr，很烦躁感觉，每次直接划线，接种，提质粒  哈哈哈
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Onceinamoment,wethinkoneselfgrowup,oneday,wefinallyfound...
9楼2011-10-31 16:24:19
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