| 查看: 1632 | 回复: 6 | |||
WANGZHONGAC至尊木虫 (正式写手)
|
[求助]
回收片段连接以后为什么变短了？在线等
|
PCR回收的片段3000bp，跑电泳检验过了，但是连接以后再P就变成2000了，提的质粒酶切大小也不对，请问各位大虾这是怎么回事呀？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有69人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 线形DNA复制时是两条子代链的5撇末端都变短吗?
已经有4人回复
- 用pMD 19-T做克隆之后用哪对通用引物做菌落PCR以及测序呢？
已经有7人回复
- 表达载体和目的片段链接问题
已经有7人回复
- 长片段连接问题
已经有14人回复
- 什么方法确定插入目的片段后表达载体的阅读框有无发生变化？
已经有9人回复
- 9.0kb载体与2.4kb片段为什么用T4连接酶连接，没有得到阳性克隆？
已经有7人回复
- 怎么预期酶切产物的大小？
已经有8人回复
- PCR大片段问题
已经有15人回复
- T载体的阴性对照菌落比实验组多
已经有3人回复
- 载体酶切位点与目的片段重复
已经有13人回复
- 90bp小片段的回收
已经有16人回复
- 2.7Kb的片段连接问题
已经有6人回复
- 请问，切胶回收后电泳检测，条带特别模糊，几乎看不到，还能继续连接转化吗
已经有10人回复
- 哪位好心人给我讲讲DGGE后切胶回收、连接、转化、克隆到测序的过程？？
已经有7人回复
- 切胶回收后片段不单一的原因
已经有12人回复
- 电泳条带呈括号状，中间很暗，这是为什么
已经有4人回复
- PCR回收产物放了两天之后再做连接有问题吗？
已经有13人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
已经有19人回复
青菜小虫
银虫 (著名写手)
风居住的街道
- MolEPI: 5
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1666.5
- 散金: 1249
- 红花: 29
- 帖子: 1111
- 在线: 352.2小时
- 虫号: 1332002
- 注册: 2011-06-27
- 性别: MM
- 专业: 病毒学
2楼2011-07-08 10:50:26
WANGZHONGAC
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11369.5
- 帖子: 362
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 229276
- 注册: 2006-03-25
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2011-07-08 11:17:38
足下客
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 10
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1858.8
- 散金: 211
- 红花: 12
- 帖子: 888
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 426612
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 临床分子生物学检验
【答案】应助回帖
★ ★ ★
WANGZHONGAC(金币+1): 2011-07-08 15:55:01
西瓜(金币+3): 有理噢 2011-07-08 19:12:12
WANGZHONGAC(金币+1): 2011-07-08 15:55:01
西瓜(金币+3): 有理噢 2011-07-08 19:12:12
|
PCR结束后回收的片段你是连到了T载体上还是其他的载体上？ 如果是连接到了T载体上，出现这种情况的可能原因是你的引物与载体的某段序列的相似度比较高，所以你做PCR验证的片段并不是你连接上去的片段。 不过根据你说的提质粒的大小和酶切验证都不对，我猜测你连的应该不是T载体，如果是连到其他载体上，在连接之前肯定要进行双酶切的，酶切位点没有选好，造成需要的PCR片段被切断了，或者是你选的内切酶特异性不高。你要仔细检查一下你PCR得到得片段，看看有没有容易被酶切断的位点。 |
4楼2011-07-08 11:31:36
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
5楼2011-07-08 12:10:56
WANGZHONGAC
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11369.5
- 帖子: 362
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 229276
- 注册: 2006-03-25
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2011-07-08 12:53:53
足下客
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 10
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1858.8
- 散金: 211
- 红花: 12
- 帖子: 888
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 426612
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 临床分子生物学检验
7楼2011-07-08 13:34:19
10