| 查看: 1694 | 回复: 3 | ||
mengbiotech金虫 (小有名气)
|
[求助]
T载体的阴性对照菌落比实验组多
|
|
最近在做PCR产物连接，产物长度10 kb，切胶回收； 分别用pMD18T和pGEMT载体连接，有实验组，阳性对照和阴性对照； 载体与片段的摩尔比为1:5；连接前将片段在60℃水浴10 min消除高级结构； 转化过夜后发现： 阳性对照平板基本长满，阴性对照比实验组长的菌落多。 按理说即使连不上的话，阴性对照和实验组不也应该是一样多的吗？ 自己考虑可能的原因是实验组的PCR产物是溶解在elution buffer中，而阴性对照组加的是ddH2O，buffer中的各种离子可能影响了连接效率。 请问还有别的可能的原因吗？ 此外，大家有没有推荐的方法连接10 kb这么大的片段啊？ 不胜感激。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有179人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
-
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因·
已经有21人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 双酶切，体系，切不出来
已经有10人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- 用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
已经有3人回复
dcb005
金虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 1108.8
- 散金: 110
- 红花: 2
- 帖子: 1850
- 在线: 103.1小时
- 虫号: 275937
- 注册: 2006-09-02
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-06-26 09:18:43
mengbiotech
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 418.8
- 散金: 2284
- 红花: 6
- 帖子: 141
- 在线: 217.2小时
- 虫号: 1524465
- 注册: 2011-12-05
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
3楼2013-06-26 09:38:46
dcb005
金虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 1108.8
- 散金: 110
- 红花: 2
- 帖子: 1850
- 在线: 103.1小时
- 虫号: 275937
- 注册: 2006-09-02
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-06-26 16:24:45