| 查看: 1796 | 回复: 3 | |||
mengbiotech金虫 (小有名气)
|
[求助]
T载体的阴性对照菌落比实验组多
|
|
最近在做PCR产物连接，产物长度10 kb，切胶回收； 分别用pMD18T和pGEMT载体连接，有实验组，阳性对照和阴性对照； 载体与片段的摩尔比为1:5；连接前将片段在60℃水浴10 min消除高级结构； 转化过夜后发现： 阳性对照平板基本长满，阴性对照比实验组长的菌落多。 按理说即使连不上的话，阴性对照和实验组不也应该是一样多的吗？ 自己考虑可能的原因是实验组的PCR产物是溶解在elution buffer中，而阴性对照组加的是ddH2O，buffer中的各种离子可能影响了连接效率。 请问还有别的可能的原因吗？ 此外，大家有没有推荐的方法连接10 kb这么大的片段啊？ 不胜感激。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有258人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因·
已经有21人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 双酶切，体系，切不出来
已经有10人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- 用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
已经有3人回复
dcb005
金虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 1108.8
- 散金: 110
- 红花: 2
- 帖子: 1850
- 在线: 103.1小时
- 虫号: 275937
- 注册: 2006-09-02
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-06-26 09:18:43
mengbiotech
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 420.8
- 散金: 2284
- 红花: 6
- 帖子: 141
- 在线: 217.2小时
- 虫号: 1524465
- 注册: 2011-12-05
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
3楼2013-06-26 09:38:46
dcb005
金虫 (著名写手)
- 应助: 28 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 1108.8
- 散金: 110
- 红花: 2
- 帖子: 1850
- 在线: 103.1小时
- 虫号: 275937
- 注册: 2006-09-02
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2013-06-26 16:24:45
20