24小时热门版块排行榜

返回列表

lillian菲

银虫 (小有名气)

应助: 22 (小学生)
金币: 1474.2
红花: 3
帖子: 74
在线: 29.3小时
虫号: 1642017
注册: 2012-02-25
性别: MM
专业: 生物化学

[求助] PCR大片段问题已有2人参与

大家好，最近在p片段基因，大概有7500bp，因为需要做后续好多试验，需要PCR产物较多。之前PCR结果很好，最近p的结果总不理想。需要的条带在8000bp左右，但结果在6000bp的条带很亮，根本没法做胶回收，求大家帮忙解决，很急！

360截图20130909163226089.jpg

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

如何扩增GC含量较高的片段已经有7人回复
欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！已经有25人回复
短片段PCR扩增已经有7人回复
载体和酶切片段连接的问题已经有5人回复
如何确定pcr产物是目的片段已经有19人回复
5kb大片段PCR扩增求助已经有18人回复
小片段pcr产无割胶回收已经有10人回复
PCR体系放大后无目的片段已经有15人回复
大片段连接问题已经有20人回复
求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段已经有5人回复
PCR时出现了非目的片段的超大片段条带已经有16人回复
关于融合PCR的问题已经有14人回复
反转录之后PCR扩增片段问题的请教，急急急已经有5人回复
大片段PCR扩增求助已经有34人回复
overlap PCR做不出来呐。。。。已经有23人回复
求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法已经有15人回复
高GC含量基因片段PCR问题已经有13人回复
基因组中长片段PCR应该注意的几个问题已经有14人回复
重叠PCR克隆大片段已经有4人回复
PCR ，双酶切，连接问题已经有17人回复
重叠pcr\跳跃pcr的问题已经有14人回复
RT-PCR 试验中扩增片段大小？已经有4人回复
【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段，咋办啊？？？？已经有9人回复
【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题已经有21人回复
【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题已经有11人回复
【求助/交流】关于PCR产物片段的保存！已经有10人回复

1楼 2013-09-09 16:33:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖置顶 ( 共有1个 )

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

MolEPI: 1
应助: 52 (初中生)
金币: 10313.6
红花: 3
帖子: 4281
在线: 191.7小时
虫号: 1186130
注册: 2011-01-08
性别: GG
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 22:15:40
gyesang: 回帖置顶 2013-09-30 22:15:41

根据你的情况，建议你用touch down PCR进行扩增，先用较高的退火温度扩增几个循环，然后在选择合适的退火温度。
如果上面的方法不凑效，你可以选择更好质量的酶进行扩增。比如: TOYOBO公司的KOD FX、TaKaRa公司的Tks Gflex DNA聚合酶，前面一种我用过，即使模板量很少，也能扩增出很亮的条带，而且非常适合长片段的扩增。后面的一种是我在宝生物网站上看到的，目前自己还没有使用过。
希望我说的这些对你有所帮助。