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雪强爱信

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何确定pcr产物是目的片段

本人也是新手一个,最近扩一段600bp左右的基因片段,但通过琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物,是一条大于250bp明显不到600bp的条带,特异性特别好,条带很亮!不知道是不是自己想要的目的片段。求高手指点,谢谢各位。
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-06 15:23:04
amisking: 回帖置顶 2012-08-06 20:17:26
本帖内容被屏蔽

7楼2012-08-06 11:01:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gungunak47

铁虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是marker不准呢  换个marker试试
8楼2012-08-06 14:35:25
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普通回帖

wygcsu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以去测序,然后和你的目的序列比对!!!
2楼2012-08-06 09:36:01
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-06 15:22:51
如果设计引物时,软件上给出的产物片段是600bp的话,现在跑出来的片段明显不是你要的,你的经费充足的话到也可以像楼上说的去测一下,回来比对,否则就重设几对特异性好的引物重新做吧,或者跑个梯度PCR看看不同温度的结果是否一样
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
3楼2012-08-06 09:44:50
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healy13

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2012-08-06 10:27:50
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雪强爱信

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2012-08-06 09:44:50
如果设计引物时,软件上给出的产物片段是600bp的话,现在跑出来的片段明显不是你要的,你的经费充足的话到也可以像楼上说的去测一下,回来比对,否则就重设几对特异性好的引物重新做吧,或者跑个梯度PCR看看不同温度 ...

谢谢你的建议,我试了两种退火温度,结果是一样的。
5楼2012-08-06 10:28:15
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雪强爱信

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wygcsu at 2012-08-06 09:36:01
可以去测序,然后和你的目的序列比对!!!

谢谢你的建议!
6楼2012-08-06 10:28:37
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计引物进行PCR之后,确认完毕,再进行测序,确保序列正确
9楼2012-08-06 15:32:29
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
测序是最靠谱的了。推荐测序
10楼2012-08-06 15:40:09
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