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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何确定pcr产物是目的片段
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雪强爱信

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何确定pcr产物是目的片段

本人也是新手一个，最近扩一段600bp左右的基因片段，但通过琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物，是一条大于250bp明显不到600bp的条带，特异性特别好，条带很亮！不知道是不是自己想要的目的片段。求高手指点，谢谢各位。
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1楼 2012-08-06 09:31:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gungunak47

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是marker不准呢  换个marker试试
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8楼2012-08-06 14:35:25
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普通回帖

wygcsu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以去测序，然后和你的目的序列比对！！！
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2楼2012-08-06 09:36:01
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-06 15:22:51
如果设计引物时，软件上给出的产物片段是600bp的话，现在跑出来的片段明显不是你要的，你的经费充足的话到也可以像楼上说的去测一下，回来比对，否则就重设几对特异性好的引物重新做吧，或者跑个梯度PCR看看不同温度的结果是否一样
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我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨
3楼2012-08-06 09:44:50
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healy13

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2012-08-06 10:27:50
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雪强爱信

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2012-08-06 09:44:50
如果设计引物时，软件上给出的产物片段是600bp的话，现在跑出来的片段明显不是你要的，你的经费充足的话到也可以像楼上说的去测一下，回来比对，否则就重设几对特异性好的引物重新做吧，或者跑个梯度PCR看看不同温度 ...

谢谢你的建议，我试了两种退火温度，结果是一样的。
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5楼2012-08-06 10:28:15
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雪强爱信

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wygcsu at 2012-08-06 09:36:01
可以去测序，然后和你的目的序列比对！！！

谢谢你的建议！
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6楼2012-08-06 10:28:37
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-06 15:23:04
amisking: 回帖置顶 2012-08-06 20:17:26
本帖内容被屏蔽
7楼2012-08-06 11:01:08
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84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
设计引物进行PCR之后，确认完毕，再进行测序，确保序列正确
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9楼2012-08-06 15:32:29
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序是最靠谱的了。推荐测序
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10楼2012-08-06 15:40:09
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