应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何确定pcr产物是目的片段
202/2返回列表上一页12
查看: 2815  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

damaomao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
11楼2012-08-06 16:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主是否你的模板是CDNA？如果是CDNA因为内含子的原因倒是可以解释的通。无论如何，测序后比对是最准确的。
赞一下 回复此楼
12楼2012-08-06 18:42:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪强爱信

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-06 18:42:00
楼主是否你的模板是CDNA？如果是CDNA因为内含子的原因倒是可以解释的通。无论如何，测序后比对是最准确的。

我的模板是原核基因组DNA，本人总感觉跟marker有关系，换了marker后长度也变了！郁闷了，我用的是1.2%的胶，marker是500bp ladder
赞一下 回复此楼
13楼2012-08-07 08:52:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪强爱信

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ghs25372216 at 2012-08-06 11:01:08
要是你P出来差这么多，应该肯定不是你的目的片段，除非你用的染料迁移很大。建议你再审查下引物是否没问题，在一个相对大的范围内做个温度梯度PCR，理论上说600bp应该很容易P出来，况且你的引物又是特异的，建议你还 ...

染料跟迁移率有关系吗？我以为影响迁移是电场强度、核酸分子量和构象、胶浓度。你说引物如果出现问题，最大的问题是不是发生错配？其它的我尽量遵循设计引物的原则。
赞一下 回复此楼
14楼2012-08-07 09:00:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪强爱信

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gungunak47 at 2012-08-06 14:35:25
是不是marker不准呢  换个marker试试

换了marker，还真不一样
赞一下 回复此楼
15楼2012-08-07 09:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪强爱信

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wygcsu at 2012-08-06 09:36:01
可以去测序，然后和你的目的序列比对！！！

顺便问一下，测序的话用PCR产物，要多少量？
赞一下 回复此楼
16楼2012-08-07 09:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wygcsu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 雪强爱信 at 2012-08-07 09:02:49
顺便问一下，测序的话用PCR产物，要多少量？...

一般是30-50uL就可以了，具体的你可以问测序公司，现在的好像是不需要你自己纯化了，直接PCR产物就可以了。
赞一下 回复此楼
17楼2012-08-07 09:27:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghs25372216

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，欢迎常来 2012-08-07 15:46:25
本帖内容被屏蔽
18楼2012-08-07 10:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zff912

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
简便的方法是换个marker  如DL2000  如果大于500就应该是了
赞一下 回复此楼
No matter how far you may fly, never forget where you come from
19楼2012-08-07 15:00:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

测序最好的了，也就600bp，一次就够了！！省时省力！！我觉得可以二次PCR，就是凝胶回收DNA，再去P一次看看。或者设个温度梯度看看。仅供参考！
赞一下 回复此楼
20楼2012-08-09 13:34:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雪强爱信 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +10 大米饭！ 2026-03-15 13/650 2026-03-17 06:57 by laoshidan
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭