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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何确定pcr产物是目的片段
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雪强爱信

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何确定pcr产物是目的片段

本人也是新手一个，最近扩一段600bp左右的基因片段，但通过琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物，是一条大于250bp明显不到600bp的条带，特异性特别好，条带很亮！不知道是不是自己想要的目的片段。求高手指点，谢谢各位。
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1楼 2012-08-06 09:31:53
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wygcsu

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 雪强爱信 at 2012-08-07 09:02:49
顺便问一下，测序的话用PCR产物，要多少量？...

一般是30-50uL就可以了，具体的你可以问测序公司，现在的好像是不需要你自己纯化了，直接PCR产物就可以了。
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17楼2012-08-07 09:27:57
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wygcsu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以去测序，然后和你的目的序列比对！！！
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2楼2012-08-06 09:36:01
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-06 15:22:51
如果设计引物时，软件上给出的产物片段是600bp的话，现在跑出来的片段明显不是你要的，你的经费充足的话到也可以像楼上说的去测一下，回来比对，否则就重设几对特异性好的引物重新做吧，或者跑个梯度PCR看看不同温度的结果是否一样
赞一下 回复此楼
我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨
3楼2012-08-06 09:44:50
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healy13

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2012-08-06 10:27:50
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