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lillian菲

银虫 (小有名气)

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[求助] PCR大片段问题已有2人参与

大家好，最近在p片段基因，大概有7500bp，因为需要做后续好多试验，需要PCR产物较多。之前PCR结果很好，最近p的结果总不理想。需要的条带在8000bp左右，但结果在6000bp的条带很亮，根本没法做胶回收，求大家帮忙解决，很急！

360截图20130909163226089.jpg

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1楼 2013-09-09 16:33:27

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liujianmin68

木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 22:15:40
gyesang: 回帖置顶 2013-09-30 22:15:41

根据你的情况，建议你用touch down PCR进行扩增，先用较高的退火温度扩增几个循环，然后在选择合适的退火温度。
如果上面的方法不凑效，你可以选择更好质量的酶进行扩增。比如: TOYOBO公司的KOD FX、TaKaRa公司的Tks Gflex DNA聚合酶，前面一种我用过，即使模板量很少，也能扩增出很亮的条带，而且非常适合长片段的扩增。后面的一种是我在宝生物网站上看到的，目前自己还没有使用过。
希望我说的这些对你有所帮助。