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WANGZHONGAC至尊木虫 (正式写手)
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回收片段连接以后为什么变短了？在线等
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PCR回收的片段3000bp，跑电泳检验过了，但是连接以后再P就变成2000了，提的质粒酶切大小也不对，请问各位大虾这是怎么回事呀？ |
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2楼2011-07-08 10:50:26
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【答案】应助回帖
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WANGZHONGAC(金币+1): 2011-07-08 15:55:01
西瓜(金币+3): 有理噢 2011-07-08 19:12:12
WANGZHONGAC(金币+1): 2011-07-08 15:55:01
西瓜(金币+3): 有理噢 2011-07-08 19:12:12
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PCR结束后回收的片段你是连到了T载体上还是其他的载体上？ 如果是连接到了T载体上，出现这种情况的可能原因是你的引物与载体的某段序列的相似度比较高，所以你做PCR验证的片段并不是你连接上去的片段。 不过根据你说的提质粒的大小和酶切验证都不对，我猜测你连的应该不是T载体，如果是连到其他载体上，在连接之前肯定要进行双酶切的，酶切位点没有选好，造成需要的PCR片段被切断了，或者是你选的内切酶特异性不高。你要仔细检查一下你PCR得到得片段，看看有没有容易被酶切断的位点。 |
4楼2011-07-08 11:31:36
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