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damo8912

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 90bp小片段的回收

90bp的片段胶回收检测什么也没有。回收试剂盒上写着小于400bp的加等凝胶体积的异丙醇，加异丙醇后明显能看到有沉淀析出，想问一下加异丙醇的作用是什么，还有那个沉淀是什么，还有回收这样的小片段有什么好的方法呢。

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1楼 2013-05-25 14:40:32

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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

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damo8912(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:21:49

离心之后将收集管中的溶液重新加入吸附柱中再次离心，以增加得率。

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2楼2013-05-25 16:08:23

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anygene_seq

新虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:00

加入异丙醇就是为了沉淀析出，沉淀就是DNA，所有DNA都是不溶于异丙醇。建议你加入异丙醇，混匀后放入-20度静置30min，然后12000冷冻离心10min，去掉上清，用少量溶胶液洗涤管壁DNA，再反复过柱2次。应该能回收到，一般的胶回收柱对于小片段回收率都很低的。你还可以用桥式PCR试试，测序公司一般都是这样做的。

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4楼2013-05-25 22:35:24

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