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damo8912

铜虫 (初入文坛)

[求助] 90bp小片段的回收

90bp的片段胶回收检测什么也没有。回收试剂盒上写着小于400bp的加等凝胶体积的异丙醇,加异丙醇后明显能看到有沉淀析出,想问一下加异丙醇的作用是什么,还有那个沉淀是什么,还有回收这样的小片段有什么好的方法呢。
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植物科研男

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:42
你用的是qigen的试剂盒吧。它最小的能回收100bp的条带,再小的话就直接从膜上离心下去了,所以得率非常低。它增对超小片段和超大片段还有两外一个kit,可以用那个试试。
坚持就是胜利
8楼2013-05-26 12:05:30
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
damo8912(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-26 13:21:49
离心之后将收集管中的溶液重新加入吸附柱中再次离心,以增加得率。
2楼2013-05-25 16:08:23
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damo8912

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hlwnxfd2011 at 2013-05-25 16:08:23
离心之后将收集管中的溶液重新加入吸附柱中再次离心,以增加得率。

恩 谢谢 我有这样做 水浴5min离心重吸再水浴5min离心
3楼2013-05-25 22:32:37
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anygene_seq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:00
加入异丙醇就是为了沉淀析出,沉淀就是DNA,所有DNA都是不溶于异丙醇。建议你加入异丙醇,混匀后放入-20度静置30min,然后12000冷冻离心10min,去掉上清,用少量溶胶液洗涤管壁DNA,再反复过柱2次。应该能回收到,一般的胶回收柱对于小片段回收率都很低的。你还可以用桥式PCR试试,测序公司一般都是这样做的。
4楼2013-05-25 22:35:24
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