24小时热门版块排行榜    

查看: 1881  |  回复: 4

alice

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 重叠PCR引物,两个片段分别回收后存在杂带是怎么回事

如题,我设计了重叠PCR的引物,在分别PCR两个片段后,胶回收,PCR产物没有或只有少量杂带,可是胶回收后杂带更明显,也不一定是PCR产物中存在的杂带,哪位同学知道是怎么回事???
PS:已经重复做过好多次,结果都是一样的,求解释和解决的办法!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

To be strong enough
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alice

铁杆木虫 (正式写手)

各位来帮忙解决下吧
To be strong enough
2楼2013-04-02 09:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
alice: 金币+1, 有帮助, 谢谢,我PCR的结果是对的,甚至没有杂带,只是胶回收之后会出现杂带! 2013-04-02 14:44:53
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-04-03 08:02:43
PCR产物不是目的条带就不要回收了,要不然回收了也是错的。另外如果PCR的结果拖尾比较厉害,那在胶回收的时候尽量吧拖尾的部分切掉,要不然胶回收验证的时候这种现象会更厉害。如果PCR无目的条带,那可能是引物或模板有问题。
3楼2013-04-02 14:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
alice: 金币+1, 有帮助, 应该不是试剂盒的问题,我们做其他的是没问题的,而且我们电压已经用到了很低,跑了一个多小时,杂带比目的条带要大差不多一半…… 2013-04-04 13:41:40
建议胶回收的时候跑的慢一点,电压小一点,尽量把条带跑锐利了,如果是小片段,最好用高浓度胶,跑长一点,切胶时才能去除杂带。再者,你胶回收后的杂带是比目的条带小吗?会不会试剂盒的东西有DNase污染?
4楼2013-04-03 12:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-04 07:52:51
alice: 金币+1, 有帮助, 这个问题是出现在做重叠PCR之前,因为一直不纯,所以没能继续往下做 2013-04-04 13:42:57
在OVERLAP的时候注意两个模板的mol数比例,一般短的片段的量稍微多些会好些
坚持不懈,终会成功!
5楼2013-04-03 23:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alice 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +3 vv迷 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:05 by f19980501
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 材料工程(专)一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:38 by 学员8dgXkO
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:35 by 学员8dgXkO
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油!? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
信息提示
请填处理意见