应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助PCR杂带过多！
91/1返回列表
查看: 2143  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

张俊亚

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助PCR杂带过多！ 已有7人参与

我是从污水处理厂污泥中提取的总DNA，用来P MXAF基因的保守区的500bp左右的序列！，可是每次都是杂带过多，并且都是很靠近目的条带！请问下PCR杂带过多的话应该去调节哪些的用量？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-10 15:46:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张俊亚

木虫 (正式写手)
帮忙下，谢谢啦！总要有个方向才好！
赞一下 回复此楼
2楼2010-08-10 15:48:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励一下。 2010-08-10 21:03:36
PCR结果不好的原因多种多样，但万变不离其踪，减少非特异扩增可以改变引物序列，提高退火温度，减少模板的量；也可以用热启动的方法。祝lz好运！
赞一下(2人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-08-10 15:58:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张俊亚

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-08-10 15:58:51:
PCR结果不好的原因多种多样，但万变不离其踪，减少非特异扩增可以改变引物序列，提高退火温度，减少模板的量；也可以用热启动的方法。祝lz好运！

多谢，我尝试一下，减少模板用量吧！退火温度，我用的58度应该差不多，但是如果模板过多不应该有二聚体存在吗  ？我的没有二聚体，就是很明显很多的杂带！
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-10 16:01:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fang8596

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以试试Tm梯度扫一下～
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-08-10 16:07:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fykxy_206

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我是从污水处理厂污泥中提取的总DNA
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2288935&fpage=1

基因组DNA是单一的吗？
看你的意思好像不是，那就有可能在差不多相同的位置出现条带。因为很多不同的DNA自然能P出不同的条带。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-10 16:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
极有可能是几种不同的微生物均有此基因，但序列略有差异，恰好你设计的引物都能将他们扩出来。建议延长下电泳时间，将各个条带都切胶回收连接测序。此外，除了楼上说的方法外，可考虑降低镁离子浓度来提高扩增特异性。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-08-10 18:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
提高退火温度，采用热启动PCR（热启动PCR酶扩增即可）
赞一下 回复此楼
8楼2015-07-06 17:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
二聚体是指引物两两结合形成的小bp弥散条带。跟你模板还多少无关。你这个估计还是引物特异性不够引起的，去blast下

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-06 18:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张俊亚 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 08:24 by byEJ59EAM6hR
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭