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张俊亚

木虫 (正式写手)

应助: 43 (小学生)
金币: 4974.3
散金: 397
红花: 14
帖子: 698
在线: 514.6小时
虫号: 1061393
注册: 2010-07-20
性别: GG
专业: 环境微生物学

[交流] 【求助/交流】求助PCR杂带过多！已有7人参与

我是从污水处理厂污泥中提取的总DNA，用来P MXAF基因的保守区的500bp左右的序列！，可是每次都是杂带过多，并且都是很靠近目的条带！请问下PCR杂带过多的话应该去调节哪些的用量？谢谢！

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1楼 2010-08-10 15:46:50

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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 61 (初中生)
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虫号: 859417
注册: 2009-09-29
专业: 发育生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

极有可能是几种不同的微生物均有此基因，但序列略有差异，恰好你设计的引物都能将他们扩出来。建议延长下电泳时间，将各个条带都切胶回收连接测序。此外，除了楼上说的方法外，可考虑降低镁离子浓度来提高扩增特异性。

赞一下(1人)

7楼2010-08-10 18:30:37

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