应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】样品PCR老是涂抹带是怎么回事
111/2返回列表12下一页
查看: 2779  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wwling

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】样品PCR老是涂抹带是怎么回事 已有9人参与

用质粒扩增结果很好，但一用样品扩就是涂抹带啊[img]
[img][/img]
图中那个条带是阳性对照，质粒做的，其余全都是样品PCR，体系一样
希望大家帮忙分析下什么原因~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

微生物生态学

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-22 21:07:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

铯铯

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-22 23:13:02
用的maker是DL2000么，目的带是500bp？感觉有些上样孔可能有目的扩增带，不过感觉更多的都是引物二聚体，建议把引物浓度降低一点（25微升体系，用0.1微摩就足够了），引物是很灵敏的，还可以把扩增温度稍稍提高一两度，当然要保证阳性对照也能扩增出来
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-11-22 21:18:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwling

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 铯铯 at 2010-11-22 21:18:38:
用的maker是DL2000么，目的带是500bp？感觉有些上样孔可能有目的扩增带，不过感觉更多的都是引物二聚体，建议把引物浓度降低一点（25微升体系，用0.1微摩就足够了），引物是很灵敏的，还可以把扩增温度稍稍提高一 ...

谢谢回复 我的20ul体系 用了0.4uM  嗯 明天降低下看看
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-22 21:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-22 23:13:30
引用回帖:
Originally posted by wwling at 2010-11-22 21:33:24:



谢谢回复 我的20ul体系 用了0.4uM  嗯 明天降低下看看

除了上面的，建议你可以少上点样 。或者PCR循环数少点。太亮了，
有时候我基因组上样多了，也是一团，稀释后就是单一带了。

我个人认为，不是PCR的问题，是胶和上样的问题。
如果排除了胶和上样，建议你换一个酶，试试高保真的。我用生工的酶P过和
你类似的，换高保真后就没问题了。

[ Last edited by adslye on 2010-11-22 at 22:24 ]
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-11-22 22:23:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胖胖113

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-23 08:44:21
条带有点亮，试试降低引物浓度，如果效果不明显，试试减少循环次数，还有让PCR仪适当的休息一下，然后再做。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-11-23 01:07:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

langduiyue

银虫 (小有名气)
加大 mg2+ 的浓度
回复此楼
角逐自我
6楼2010-11-23 08:23:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

85715623

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板浓度太高了，应该稀释
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-11-23 08:43:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jane20067879

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也曾遇到这样的问题。
你可以试试提高退火温度；减低引物的浓度；稀释一下DNA样品；
或者再做一下二次PCR。
每次改变一个条件，其他条件不变，就可以查出是什么问题导致的。
赞一下(1人) 回复此楼
给力，2011
8楼2010-11-23 08:46:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
尽量不要用PCR产物做模板，有质粒就用质粒。这样会避免很多麻烦。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-11-23 11:10:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwling

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-11-22 22:23:33:


除了上面的，建议你可以少上点样 。或者PCR循环数少点。太亮了，
有时候我基因组上样多了，也是一团，稀释后就是单一带了。

我个人认为，不是PCR的问题，是胶和上样的问题。
如果排除了胶和上样，建议你 ...

嗯 上样少点后的确可以没那么明显 不过还是涂抹带 目的条带很淡
你提到用PFU酶 以前也有人这样建议过 不知道是什么原理呢？ 我的酶在普通PCR上样品扩得还可以 但是一上定量PCR仪器 就只有质粒出来条带
赞一下 回复此楼
10楼2010-11-23 14:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwling 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +6 大米饭！ 2026-03-15 6/300 2026-03-16 07:58 by wang_dand
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 一志愿天津大学，英一数二305分求调剂，四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 考研材料与化工，求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:14 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 7/350 2026-03-13 17:28 by xujiaoszu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 293求调剂，一志愿陕师大生物学 +3 ??????.?.??? 2026-03-09 3/150 2026-03-11 10:02 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭