24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1924  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

alice

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 重叠PCR引物,两个片段分别回收后存在杂带是怎么回事

如题,我设计了重叠PCR的引物,在分别PCR两个片段后,胶回收,PCR产物没有或只有少量杂带,可是胶回收后杂带更明显,也不一定是PCR产物中存在的杂带,哪位同学知道是怎么回事???
PS:已经重复做过好多次,结果都是一样的,求解释和解决的办法!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

To be strong enough
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
alice: 金币+1, 有帮助, 谢谢,我PCR的结果是对的,甚至没有杂带,只是胶回收之后会出现杂带! 2013-04-02 14:44:53
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-04-03 08:02:43
PCR产物不是目的条带就不要回收了,要不然回收了也是错的。另外如果PCR的结果拖尾比较厉害,那在胶回收的时候尽量吧拖尾的部分切掉,要不然胶回收验证的时候这种现象会更厉害。如果PCR无目的条带,那可能是引物或模板有问题。
3楼2013-04-02 14:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

alice

铁杆木虫 (正式写手)

各位来帮忙解决下吧
To be strong enough
2楼2013-04-02 09:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
alice: 金币+1, 有帮助, 应该不是试剂盒的问题,我们做其他的是没问题的,而且我们电压已经用到了很低,跑了一个多小时,杂带比目的条带要大差不多一半…… 2013-04-04 13:41:40
建议胶回收的时候跑的慢一点,电压小一点,尽量把条带跑锐利了,如果是小片段,最好用高浓度胶,跑长一点,切胶时才能去除杂带。再者,你胶回收后的杂带是比目的条带小吗?会不会试剂盒的东西有DNase污染?
4楼2013-04-03 12:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-04 07:52:51
alice: 金币+1, 有帮助, 这个问题是出现在做重叠PCR之前,因为一直不纯,所以没能继续往下做 2013-04-04 13:42:57
在OVERLAP的时候注意两个模板的mol数比例,一般短的片段的量稍微多些会好些
坚持不懈,终会成功!
5楼2013-04-03 23:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +15 ORCHID1 2026-04-10 16/800 2026-04-12 00:45 by 蓝云思雨
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 366求调剂 +7 不知名的小卅 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:45 by PeggyPeng17
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +10 木子念晞 2026-04-05 10/500 2026-04-11 10:44 by zhq0425
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +8 李政莹 2026-04-06 9/450 2026-04-11 10:36 by wwj2530616
[考研] 材料工程085601,270求调剂 +30 @ASDF1234 2026-04-08 32/1600 2026-04-11 10:30 by Delta2012
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +16 路痴小琪 2026-04-05 16/800 2026-04-10 08:08 by kangsm
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 求考研材料调剂 +3 材化李可 2026-04-07 3/150 2026-04-08 00:21 by JourneyLucky
[考研] 0854电子信息319求调剂(接受跨专业调剂) +5 星星不眨眼喽 2026-04-05 6/300 2026-04-07 22:16 by hemengdong
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 22408 318分求调剂 +4 勤奋的小笼包 2026-04-06 6/300 2026-04-07 15:05 by 纸鹤555
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见