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abc2207154

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物扩增片段的长度

我做完PCR跑琼脂糖电泳,所得到的产物扩增片段的长度要远远长于这个引物已知的片段长度,这是怎么回事,该如何解决?谢谢
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522008

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是引物特异性太差,扩增出来的可能不是目的基因。
2楼2012-11-04 16:33:13
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songxuebai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-08 13:42:26
应该是引物特异性差,错配太多。目的条带要是有的话,可以适当提高退火温度,提高特异性扩增;要是一点痕迹都没有的话,只能重新设计引物了。
3楼2012-11-04 18:33:35
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竹子小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一个是错配,还有一个是你东西根本没P出来,你看见的是基因组杂带
4楼2012-11-04 19:36:55
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abc2207154

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-04 19:36:55
一个是错配,还有一个是你东西根本没P出来,你看见的是基因组杂带

如果是基因组杂带的话那不应该只有一条杂带啊,而且在不同温度下都是那一条
5楼2012-11-05 16:05:30
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
切胶,回收,连接,测序,看看到底是什么东西。或者,重新设计引物,pcr
6楼2012-11-06 10:58:02
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abc2207154

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我爱沈泉 at 2012-11-06 10:58:02
切胶,回收,连接,测序,看看到底是什么东西。或者,重新设计引物,pcr

我用的引物不是自己设计的是文献已发表的,我用pcr后的体系直接去测序不行么
7楼2012-11-06 15:47:59
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by abc2207154 at 2012-11-06 15:47:59
我用的引物不是自己设计的是文献已发表的,我用pcr后的体系直接去测序不行么...

可以啊!扩增体系大一点来个50或者100微升。。。
8楼2012-11-07 17:11:37
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abc2207154

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 我爱沈泉 at 2012-11-07 17:11:37
可以啊!扩增体系大一点来个50或者100微升。。。...

我做p一段时间能扩出来,一段时间扩不出来,这到底是什么原因啊
9楼2012-11-08 09:40:26
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