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abc2207154

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物扩增片段的长度

我做完PCR跑琼脂糖电泳，所得到的产物扩增片段的长度要远远长于这个引物已知的片段长度，这是怎么回事，该如何解决？谢谢
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1楼2012-11-04 15:30:34
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522008

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是引物特异性太差，扩增出来的可能不是目的基因。
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2楼2012-11-04 16:33:13
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songxuebai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-08 13:42:26
应该是引物特异性差，错配太多。目的条带要是有的话，可以适当提高退火温度，提高特异性扩增；要是一点痕迹都没有的话，只能重新设计引物了。
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3楼2012-11-04 18:33:35
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竹子小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一个是错配，还有一个是你东西根本没P出来，你看见的是基因组杂带
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4楼2012-11-04 19:36:55
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abc2207154

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-04 19:36:55
一个是错配，还有一个是你东西根本没P出来，你看见的是基因组杂带

如果是基因组杂带的话那不应该只有一条杂带啊，而且在不同温度下都是那一条
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5楼2012-11-05 16:05:30
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
切胶，回收，连接，测序，看看到底是什么东西。或者，重新设计引物，pcr
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6楼2012-11-06 10:58:02
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abc2207154

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 我爱沈泉 at 2012-11-06 10:58:02
切胶，回收，连接，测序，看看到底是什么东西。或者，重新设计引物，pcr

我用的引物不是自己设计的是文献已发表的，我用pcr后的体系直接去测序不行么
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7楼2012-11-06 15:47:59
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by abc2207154 at 2012-11-06 15:47:59
我用的引物不是自己设计的是文献已发表的，我用pcr后的体系直接去测序不行么...

可以啊！扩增体系大一点来个50或者100微升。。。
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8楼2012-11-07 17:11:37
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abc2207154

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 我爱沈泉 at 2012-11-07 17:11:37
可以啊！扩增体系大一点来个50或者100微升。。。...

我做p一段时间能扩出来，一段时间扩不出来，这到底是什么原因啊
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9楼2012-11-08 09:40:26
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