| 查看: 1126 | 回复: 3 | ||
[求助]
兼并引物的一些问题
|
| 我设计了一对兼并引物，扩增出来和理论值长度相似的片段。但测序结果显示并不是我想要的酶的基因片段，并且通过基因比对和自己当初设计兼并引物时参考的菌的该酶的基因相似度就30%。请问还有需要做RACE,酶切，连接，转化，表达·····的必要吗？是否在此就该放弃，另找出路？ |
回复此楼» 猜你喜欢
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有8人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有203人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有13人回复
-
国际普刊官网征稿INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE
已经有8人回复
-
200一版的国际普刊（新刊活动），全流程只需七天
已经有2人回复
-
适合大创赛生科赛结项，学分紧急的同学，国际新刊INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE
已经有18人回复
-
INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE 第三期开放投稿，审稿快、版面费低
已经有14人回复
-
新审查指南施行半年，AI方向的专利申请是不是更看"技术味"了？
已经有20人回复
-
专利优先审查新办法出了，哪些成果值得走快速预审通道？
已经有33人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 简并引物需要加保护碱基吗
已经有7人回复
- 兼并引物的退火温度
已经有5人回复
- 兼并引物 里边有多个兼并碱基好吗？
已经有24人回复
- 同源比对设计简并引物PCR产物测序不符！
已经有10人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- P450酶
已经有17人回复
- 【求助/交流】引物的字母问题
已经有13人回复
- 【求助】求教基因克隆中的引物设计问题【有效期至2010年11月18日】
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于基因克隆写文章的问题
已经有9人回复
coal@live.cn
新虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 61.5
- 散金: 10
- 红花: 3
- 帖子: 60
- 在线: 25.6小时
- 虫号: 1867695
- 注册: 2012-06-23
- 专业: 林木遗传育种学
2楼2012-07-12 18:22:16
3楼2012-07-15 10:52:57
coal@live.cn
新虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 61.5
- 散金: 10
- 红花: 3
- 帖子: 60
- 在线: 25.6小时
- 虫号: 1867695
- 注册: 2012-06-23
- 专业: 林木遗传育种学
|
因为密码子有简并性，所以通常同一个基因的氨基酸序列相似性应该会高于核酸序列吧。基因克隆我没做过，我也不知道30％的氨基酸序列相似度是什么标准，如果比通常的基因克隆标准低的话，那lz你还是放弃然后重新P吧。 嗯，如果你有余力的话，可以试试把这段序列翻译成核酸序列再去比对，说不定会有新发现 建议你找简并性低的氨基酸序列设计简并引物，以尽量减少引物的数量，甚至可以将一对简并引物分成N对不同组成的引物（比如本来上游有4个简并引物，下游有5个简并引物，你可以分成4组，其中每组各有1个上游引物，下游依然是原来的5个），由于有效引物浓度太低或是形成引物二聚体等原因而导致简并PCR失败其实很正常，lz再多多尝试吧。 |
4楼2012-07-15 12:08:19
20