24小时热门版块排行榜    

查看: 1889  |  回复: 4

alice

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 重叠PCR引物,两个片段分别回收后存在杂带是怎么回事

如题,我设计了重叠PCR的引物,在分别PCR两个片段后,胶回收,PCR产物没有或只有少量杂带,可是胶回收后杂带更明显,也不一定是PCR产物中存在的杂带,哪位同学知道是怎么回事???
PS:已经重复做过好多次,结果都是一样的,求解释和解决的办法!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

To be strong enough
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alice

铁杆木虫 (正式写手)

各位来帮忙解决下吧
To be strong enough
2楼2013-04-02 09:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
alice: 金币+1, 有帮助, 谢谢,我PCR的结果是对的,甚至没有杂带,只是胶回收之后会出现杂带! 2013-04-02 14:44:53
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-04-03 08:02:43
PCR产物不是目的条带就不要回收了,要不然回收了也是错的。另外如果PCR的结果拖尾比较厉害,那在胶回收的时候尽量吧拖尾的部分切掉,要不然胶回收验证的时候这种现象会更厉害。如果PCR无目的条带,那可能是引物或模板有问题。
3楼2013-04-02 14:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
alice: 金币+1, 有帮助, 应该不是试剂盒的问题,我们做其他的是没问题的,而且我们电压已经用到了很低,跑了一个多小时,杂带比目的条带要大差不多一半…… 2013-04-04 13:41:40
建议胶回收的时候跑的慢一点,电压小一点,尽量把条带跑锐利了,如果是小片段,最好用高浓度胶,跑长一点,切胶时才能去除杂带。再者,你胶回收后的杂带是比目的条带小吗?会不会试剂盒的东西有DNase污染?
4楼2013-04-03 12:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-04 07:52:51
alice: 金币+1, 有帮助, 这个问题是出现在做重叠PCR之前,因为一直不纯,所以没能继续往下做 2013-04-04 13:42:57
在OVERLAP的时候注意两个模板的mol数比例,一般短的片段的量稍微多些会好些
坚持不懈,终会成功!
5楼2013-04-03 23:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alice 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 寻找调剂 +3 倔强芒? 2026-03-21 3/150 2026-03-22 14:27 by 30660438
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +3  ̄^ ̄゜汗 2026-03-19 5/250 2026-03-22 14:03 by  ̄^ ̄゜汗
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +6 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-21 17:21 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 321求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见