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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重叠PCR引物，两个片段分别回收后存在杂带是怎么回事
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alice

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 重叠PCR引物，两个片段分别回收后存在杂带是怎么回事

如题，我设计了重叠PCR的引物，在分别PCR两个片段后，胶回收，PCR产物没有或只有少量杂带，可是胶回收后杂带更明显，也不一定是PCR产物中存在的杂带，哪位同学知道是怎么回事？？？
PS:已经重复做过好多次，结果都是一样的，求解释和解决的办法！！！
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To be strong enough
1楼 2013-04-01 21:33:01
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alice

铁杆木虫 (正式写手)
各位来帮忙解决下吧
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To be strong enough
2楼2013-04-02 09:20:57
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冰封之real

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
alice: 金币+1, ★有帮助, 谢谢，我PCR的结果是对的，甚至没有杂带，只是胶回收之后会出现杂带！ 2013-04-02 14:44:53
wizardfan: 金币+2, 鼓励新虫发帖 2013-04-03 08:02:43
PCR产物不是目的条带就不要回收了，要不然回收了也是错的。另外如果PCR的结果拖尾比较厉害，那在胶回收的时候尽量吧拖尾的部分切掉，要不然胶回收验证的时候这种现象会更厉害。如果PCR无目的条带，那可能是引物或模板有问题。
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3楼2013-04-02 14:13:03
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
alice: 金币+1, ★有帮助, 应该不是试剂盒的问题，我们做其他的是没问题的，而且我们电压已经用到了很低，跑了一个多小时，杂带比目的条带要大差不多一半…… 2013-04-04 13:41:40
建议胶回收的时候跑的慢一点，电压小一点，尽量把条带跑锐利了，如果是小片段，最好用高浓度胶，跑长一点，切胶时才能去除杂带。再者，你胶回收后的杂带是比目的条带小吗？会不会试剂盒的东西有DNase污染？
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4楼2013-04-03 12:15:09
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-04 07:52:51
alice: 金币+1, ★有帮助, 这个问题是出现在做重叠PCR之前，因为一直不纯，所以没能继续往下做 2013-04-04 13:42:57
在OVERLAP的时候注意两个模板的mol数比例，一般短的片段的量稍微多些会好些
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坚持不懈,终会成功!
5楼2013-04-03 23:11:27
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