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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 90bp小片段的回收
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damo8912

铜虫 (初入文坛)

[求助] 90bp小片段的回收

90bp的片段胶回收检测什么也没有。回收试剂盒上写着小于400bp的加等凝胶体积的异丙醇，加异丙醇后明显能看到有沉淀析出，想问一下加异丙醇的作用是什么，还有那个沉淀是什么，还有回收这样的小片段有什么好的方法呢。
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1楼 2013-05-25 14:40:32
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anygene_seq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:00
加入异丙醇就是为了沉淀析出，沉淀就是DNA，所有DNA都是不溶于异丙醇。建议你加入异丙醇，混匀后放入-20度静置30min，然后12000冷冻离心10min，去掉上清，用少量溶胶液洗涤管壁DNA，再反复过柱2次。应该能回收到，一般的胶回收柱对于小片段回收率都很低的。你还可以用桥式PCR试试，测序公司一般都是这样做的。
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4楼2013-05-25 22:35:24
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
damo8912(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:21:49
离心之后将收集管中的溶液重新加入吸附柱中再次离心，以增加得率。
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2楼2013-05-25 16:08:23
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damo8912

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hlwnxfd2011 at 2013-05-25 16:08:23
离心之后将收集管中的溶液重新加入吸附柱中再次离心，以增加得率。

恩 谢谢 我有这样做 水浴5min离心重吸再水浴5min离心
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3楼2013-05-25 22:32:37
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:12
只要条带足够亮，按照试剂盒的步骤来就没问题。
电泳时胶浓度高一点，要确保条带大小是正确的。
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5楼2013-05-26 00:05:05
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