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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 切胶回收时如何将3300与3800bp两条带分开
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linjl010

银虫 (初入文坛)

[求助] 切胶回收时如何将3300与3800bp两条带分开

本人做酶切要回收目的片段，但是目的片段3300bp,载体3800bp，什么条件下电泳能将这两个片段分开，然后切胶回收。
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1楼 2011-07-06 10:43:54
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

linjl010(金币+2): 2011-07-06 11:15:19
是否可以考虑适当地将胶的浓度做大一点，低电压电泳时间长点？
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2楼2011-07-06 10:52:08
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lihuaannie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 似的 2011-07-06 13:31:32
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:37:25
同意楼上的，高浓度的胶，时间跑得长一些，再就是切胶的时候一定要切得比较窄
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3楼2011-07-06 11:28:24
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 胶浓度是不能太大 2011-07-06 17:03:12
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:38:11
完全可以分得开 胶的溶度也不宜过大
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海纳百川止于至善
4楼2011-07-06 13:32:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-07-06 17:03:22
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:38:43
1.0%是胶跑60分钟肯定能分开的。浓度高了跑的时间要注意延长，不然也分不开的。
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5楼2011-07-06 13:56:32
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
西瓜(金币+1): 很有经验噢 2011-07-06 17:03:43
其实0.8% 70v 40min 完全可以分开的。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-07-06 15:52:06
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流，最近很活跃噢 2011-07-06 17:04:04
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:39:16
我的目的片段和载体相差700bp，1.0% 90v 50min 也能分开
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生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
7楼2011-07-06 16:36:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很好，楼主照做应该ok！ 2011-07-06 17:16:05
linjl010(金币+5): 2011-07-07 08:40:50
跑长胶，我做过和楼主一样的事。

亚克隆的时候把pWEB:TNC里Amp抗性基因切了一刀，得到一个质粒，载体3.2，外源3.5，跟楼主一样的片段长度。电泳的时候上样量小，片段的条带窄，用5厘米的短胶能看得很清楚。回收外源的时候上样量大，跑了10厘米的长胶也能分开，就是切胶的时候切地窄一些，不能贪多，免得带上一点载体片段。电泳电压小一点就行，缓冲液是新换的TAE，0.8%的胶。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-07-06 17:00:13
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zhcosa

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

linjl010(金币+2): 2011-07-07 09:46:05
楼上说的很详细，学习了！按照此方法，3300和3800的差异还是很明显的，楼主切胶时注意稳准狠，没问题的～
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9楼2011-07-06 21:02:27
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