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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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linjl010

银虫 (初入文坛)

[求助] 切胶回收时如何将3300与3800bp两条带分开

本人做酶切要回收目的片段,但是目的片段3300bp,载体3800bp,什么条件下电泳能将这两个片段分开,然后切胶回收。
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peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

linjl010(金币+2): 2011-07-06 11:15:19
是否可以考虑适当地将胶的浓度做大一点,低电压电泳时间长点?
2楼2011-07-06 10:52:08
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lihuaannie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


1949stone(金币+1): 似的 2011-07-06 13:31:32
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:37:25
同意楼上的,高浓度的胶,时间跑得长一些,再就是切胶的时候一定要切得比较窄
3楼2011-07-06 11:28:24
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 胶浓度是不能太大 2011-07-06 17:03:12
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:38:11
完全可以分得开 胶的溶度也不宜过大
海纳百川止于至善
4楼2011-07-06 13:32:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good 2011-07-06 17:03:22
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:38:43
1.0%是胶跑60分钟肯定能分开的。浓度高了跑的时间要注意延长,不然也分不开的。
5楼2011-07-06 13:56:32
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


西瓜(金币+1): 很有经验噢 2011-07-06 17:03:43
其实0.8% 70v 40min 完全可以分开的。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-07-06 15:52:06
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青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流,最近很活跃噢 2011-07-06 17:04:04
linjl010(金币+2): 2011-07-07 08:39:16
我的目的片段和载体相差700bp,1.0% 90v 50min 也能分开
生命即这般无尽变数,辗转来去皆苛求不得
7楼2011-07-06 16:36:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很好,楼主照做应该ok! 2011-07-06 17:16:05
linjl010(金币+5): 2011-07-07 08:40:50
跑长胶,我做过和楼主一样的事。

亚克隆的时候把pWEB:TNC里Amp抗性基因切了一刀,得到一个质粒,载体3.2,外源3.5,跟楼主一样的片段长度。电泳的时候上样量小,片段的条带窄,用5厘米的短胶能看得很清楚。回收外源的时候上样量大,跑了10厘米的长胶也能分开,就是切胶的时候切地窄一些,不能贪多,免得带上一点载体片段。电泳电压小一点就行,缓冲液是新换的TAE,0.8%的胶。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-07-06 17:00:13
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zhcosa

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

linjl010(金币+2): 2011-07-07 09:46:05
楼上说的很详细,学习了!按照此方法,3300和3800的差异还是很明显的,楼主切胶时注意稳准狠,没问题的~
9楼2011-07-06 21:02:27
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