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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 90bp小片段的回收
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damo8912

铜虫 (初入文坛)

[求助] 90bp小片段的回收

90bp的片段胶回收检测什么也没有。回收试剂盒上写着小于400bp的加等凝胶体积的异丙醇，加异丙醇后明显能看到有沉淀析出，想问一下加异丙醇的作用是什么，还有那个沉淀是什么，还有回收这样的小片段有什么好的方法呢。
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1楼 2013-05-25 14:40:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

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damo8912(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:21:49
离心之后将收集管中的溶液重新加入吸附柱中再次离心，以增加得率。
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2楼2013-05-25 16:08:23
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anygene_seq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:00
加入异丙醇就是为了沉淀析出，沉淀就是DNA，所有DNA都是不溶于异丙醇。建议你加入异丙醇，混匀后放入-20度静置30min，然后12000冷冻离心10min，去掉上清，用少量溶胶液洗涤管壁DNA，再反复过柱2次。应该能回收到，一般的胶回收柱对于小片段回收率都很低的。你还可以用桥式PCR试试，测序公司一般都是这样做的。
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4楼2013-05-25 22:35:24
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:12
只要条带足够亮，按照试剂盒的步骤来就没问题。
电泳时胶浓度高一点，要确保条带大小是正确的。
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5楼2013-05-26 00:05:05
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小五来了

金虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:20
小片段的DNA一般不都是用那个PAGE回收的吗，然后用无菌水洗脱差不多就可以了，好的可以达到十几纳克。
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没有最好，只有更好，珍惜生命，远离读研
6楼2013-05-26 08:32:25
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光树林

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:30
我用的omega的回收试剂盒，回收155bp的片段。虽然电泳条带很弱，但是还是连接上了。所以看不到条带你可以连接试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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一路向北
7楼2013-05-26 09:32:35
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植物科研男

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 13:22:42
你用的是qigen的试剂盒吧。它最小的能回收100bp的条带，再小的话就直接从膜上离心下去了，所以得率非常低。它增对超小片段和超大片段还有两外一个kit，可以用那个试试。
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坚持就是胜利
8楼2013-05-26 12:05:30
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小五来了

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 光树林 at 2013-05-26 09:32:35
我用的omega的回收试剂盒，回收155bp的片段。虽然电泳条带很弱，但是还是连接上了。所以看不到条带你可以连接试试

这么小能回收得到？
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没有最好，只有更好，珍惜生命，远离读研
9楼2013-05-26 16:46:25
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wjzpwyz

铁虫 (正式写手)
直接用酚氯仿乙醇回收，比柱子效果好
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10楼2013-05-26 18:44:40
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光树林

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小五来了 at 2013-05-26 16:46:25
这么小能回收得到？...

你试试就知道了。我连接转化都成功了
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一路向北
12楼2013-05-26 23:38:11
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9号逐梦客

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我以前有用过一个GIQGEN的试剂盒，可以回收70bp以上的片段，你可以去看看，反正我用了是做出来了。好像天根也有小片段的回收试剂盒，你可以查查看。祝你好运啦
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为了梦想不断坚持在路上
13楼2013-05-27 08:29:20
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普通回帖

damo8912

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hlwnxfd2011 at 2013-05-25 16:08:23
离心之后将收集管中的溶液重新加入吸附柱中再次离心，以增加得率。

恩 谢谢 我有这样做 水浴5min离心重吸再水浴5min离心
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3楼2013-05-25 22:32:37
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