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漫迹超级版主
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T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
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我最近在做T载体，实验中发现连接目的片段转化DH5a后，在蓝白斑的板上出现的都是白斑，鉴定后全部是假阳性 实验已确定的是： 1 T载体构建的过程没有问题，因为刚构建好的时候连接目的片段试用后效率还是挺高的； 2 X-gal 应该没有问题，最近也有其他人用同一批IPTG X-gal，平板上也有蓝斑； 3 连接的目的片段是PCR产物，所用Taq酶不是高保真的，就是说末端是加了A的； 4 T载体和PCR产物都是切胶回收的 本人自己分析的原因有可能是T载体的T末端碱基丢失了，但是该末端是酶切后产生的，感觉不应该那么容易掉 还请高人帮忙分析一下原因，还有如果是我分析的原因该怎么避免 |
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doublehelix
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