应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆假阳性的问题
41/1返回列表
查看: 2695  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)

[求助] 克隆假阳性的问题

最近一直在做克隆，蓝白筛选长的白斑也不少，送去测序也有系列，但是一比对，就是载体序列，请问这是怎么回事啊？是阳性率太低了吗？是不是连接效率太低导致的阳性率也低？怎么提高连接效率啊？各位高手们帮忙解决一下吧。。。。

[ Last edited by asdfghjkl-00 on 2011-7-31 at 10:10 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-31 10:05:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

healerly

禁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 非常热心，破格奖励 2011-07-31 17:51:27
既然有蓝白色菌斑，说明可以转进质粒去。测序不成功，结果是空载体说明是假阳性。楼主是不是用的试剂盒？现在试剂盒载体自连的概率是很小的。
问题1：楼主不进行白色菌斑的PCR鉴定以及双酶切鉴定吗？
问题2：楼主的目的片段是多少？连接多少时间？
建议：1，在测序之前进行阳性菌株的鉴定。
      2，如果是长片段的话，建议连接过夜，可以提高连接效率。
希望楼主尽快找到问题~~实验顺利
赞一下(1人) 回复此楼
heal the world！！！
2楼2011-07-31 15:20:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mayonghong

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 学习下 2011-07-31 20:47:23
在测序前建议先进行菌液PCR进行验证，但是有的时候菌液PCR容易假阳性，也可以提质粒，电泳进行验证，现在酶连都是试剂盒，我们一般酶连时间：16℃酶连4h，或者4℃酶连过夜，还有酶连时间也不是越长越好，另外做实验室实验手法也很重要，一定要注意细节问题。
赞一下(1人) 回复此楼
一生有你
3楼2011-07-31 20:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)
问一个比较弱的问题，载体是什么？宿主是什么？有蓝斑吗？
赞一下 回复此楼
4楼2011-07-31 22:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 asdfghjkl-00 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:09 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:33 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:33 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭